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1. APSC品牌介绍
APSC主要提供有机凝胶色谱标准品(Organic GPC/SEC Standards)和水性凝胶色谱标准品(Aqueous GPC/SEC Standards)两类产品。
GPC(Gel Permeation Chromatography),凝胶渗透色谱,又称为尺寸排阻色谱(Size Exclusion Chromatography,简称SEC),它是基于体积排阻的分离机理,通过具有分子筛性质的固定相,用来分离相对分子质量较小的物质,并且还可以分析分子体积不同、具有相同化学性质的高分子化合物。
GPC是一种特殊的液相色谱,所用仪器与高效液相色谱仪类似,GPC的分离是利用体积排除机理,装填的是多孔性凝胶或微粒,孔径大小与待分离的聚合物分子相似,体积大的高分子化合物不能进入凝胶孔,最先从凝胶粒间流出,淋出体积(时间)最小,高聚物依分子量从大到小依次淋出。这样,通过做已知分子量的高分子聚合物的标准曲线,就能分析同系未知待测高分子化合物了。
2. APSC重点产品
机凝胶色谱标准品(Organic GPC/SEC Standards)和水性凝胶色谱标准品(Aqueous GPC/SEC Standards)两类产品。
3. APSC官网
http://www.ampolymer.com/
4. 金畔生物代理APSC品牌联系方式
上海金畔生物科技有限公司
地 址: 上海市浦东新区东靖路699弄36栋701室
邮 编: 201208
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DNA片段的连接技术

实验十三 DNA片段的连接技术
一、目的与原理
DNA酶切片段的联接是两DNA片段相邻的5‘磷酸和3’羟基间可有连接酶催化形成磷酸二酯键,这个连接反应在体外一般都有大肠杆菌(Escherichia coli)(Escherichia coli)(Escherichia coli)(Escherichia coli)DNA连接酶和T4DNA连接酶催化,但是分子生物学试验中主要采用T4DNA连接酶,因该酶在正常条件下,即能完成连接反应。本实验拟通过T4DNA连接酶对酶切片断的连接操作,掌握这一DNA片段的连接技术。
二、材料和方法
1. 仪器
离心机,恒温设备,真空干燥机,取液器
2. 试剂
T4DNA连接酶,10×T4DNA连接酶缓冲液、200mM Tris-HCl(pH7.6)、50mM MgCl2、50mM DTT、500μg/ml牛血清白蛋白、5mM ATP、λDNA、酚,TE缓冲液,电泳缓冲液、3M NaAc
三、操作步骤
取干净、灭菌新Eppendorf管,按下表加入各试液
试液 体积(μl)
T4DNA连接酶缓冲液 1.5
λDNA 10
ATP 1
无菌水 1.5
连接酶 1
总体积 15
19–20℃ 保温2小时,提取已连接好的DNA片段。电泳分析。
四、结果 (略)
五、注意事项
1、 该实验用的T4DNA连接酶最适反应是37℃,但该温度下DNA退火效率低,连接效率还不如22℃高。
2、 如果要检验连接酶和连接酶专用的缓冲液是否有效,可重新连接酶切后的λDNA。若连接成功,则说明有效。
实验十四 受体菌感受态细胞的制备
一、目的与原理
当细菌处于容易吸收外源DNA的状态时,即为感受态,而用理化手段使细菌处于感受态的操作为致敏过程。感受态细胞制备是重组基因能否实现转化的一个重要的技术环节。本试验是通过钙离子来诱导使之成为感受态细胞。
二、材料和方法
1. 材料:大肠杆菌(Escherichia coli)(Escherichia coli)(Escherichia coli)(Escherichia coli)
2. 仪器:
离心机,恒温摇床,恒温水浴,超净工作台,冰柜
3. 试剂
LB培养基,0.1M MgCl2,3mM氯化六氮合高钴
TFB:10Mm MES(pH6.3)
45Mm MnCl2
10Mm CaCl2
10Mm KCl
三、操作步骤
大肠杆菌(Escherichia coli)(Escherichia coli)(Escherichia coli)(Escherichia coli)在LB培养基平板上划线培养12-16小时,挑取单菌落于LB培养基摇瓶培养大肠杆菌(Escherichia coli)(Escherichia coli)(Escherichia coli)(Escherichia coli)到对数期。取1ml培养物7000rpm,离心3min,收集菌体。再重复一次。冰浴放置。用预冷的氯化镁悬浮菌体7000rpm离心3min。收集菌体,冰浴放置。用预冷的氯化钙悬浮菌体,冰浴15min, 7000rpm离心3min。收集菌体,冰浴放置。加入200μl预冷的氯化钙(或TFB),放置于冰浴,即得感受态细胞,此细胞可现用,也可进行下步操作。将悬液分装于无菌离心管中,投入液氮,然后储于-70℃保存。
四、结果 (略)
五、注意事项
一般地,新制备的感受态细胞48h后转化效率降低,15d后失效。因此,感受态细胞不能保存太久,4℃保存一周,但-80℃可保存1年。用试管分装可避免反复冻熔,损伤感受态细胞。
实验十五 重组片段的转化及克隆和筛选
一、目的与原理
转化是指以质粒DNA或以它为载体构建的重组子导入细菌的过程。转化技术在基因工程(Genetic Engineering)(Genetic Engineering)(Genetic Engineering)(Genetic Engineering)领域中占有极重要的地位。目前用得较多的转化技术为将人工构建的重组质粒到如受体细胞,使重组质粒在受体细胞中稳定地复制和表达。
二、材料和方法
1.材料:大肠杆菌(Escherichia coli)(Escherichia coli)(Escherichia coli)(Escherichia coli)
2.仪器:
离心机,恒温摇床,恒温水浴,超净工作台,冰柜
3.试剂
LB培养基; 0.1M mM CaCl2 ; 0.1M MgCl2 ;
TFB:10mM MES(pH 6.3),45mM MnCl2, 10mM CaCl2, 100mM KCl
三、操作步骤
1. 感受态细胞融化(在手心)
2. 加入溶于TE的待转化外源DNA,冰浴30min。
3. 42℃热冲击2 min。
4. 冰上2min。
5. 加入0.4 ml LB液体培养基,37℃保温摇床45 min
6. 取0.2ml菌悬液涂布在含氨苄青霉素、IPTG、X-gal培养基上,37℃培养。
四、实验结果及分析:
培养皿上有白色菌落和兰 色菌落,但兰色菌落数量很少。由于受体细胞本身的菌落为兰色,所以白色菌落说明转化成功;兰色应为转化不成功。但是由于转化的质粒经过了酶切和连接,若是在原酶切位点的连接进行的转化,菌落为白色;若为酶切去一段DNA的的连接质粒进行的转化,菌落为兰色(说明在酶切上成功,连接上也成功,转化上也成功)。
五、注意事项
关键要严格控制热激时间,超过2min,则转化会失败。
免疫学实验
实验十六 单向琼脂扩散实验
一、原理
单向琼脂扩散实验又称单向免疫扩散实验。指可溶性抗原在相应抗体的琼脂介质中的扩散,可定性、定量抗原。
二、操作步骤
1.取一块干净的玻璃板,用少量75%乙醇冲洗,晾干后置于水平台,将1%琼脂糖融化,56℃水浴中保温。
2.取15ml琼脂糖加到56℃预热玻璃管中,加入约200微升抗血清,充分混匀后铺于玻璃板上,厚度约为1㎜。
3.待凝胶凝固后打孔,直径为3㎜,将孔内琼脂弄出。
4.将系列稀释的标准抗原和待检抗原分别加到凝胶孔内,每孔5微升。
将凝胶板置于湿盒内,室温过夜,观察结果。
三、实验结果
发现沉淀环的大小与抗原的浓度成反比,基本成线性相关。其大小不仅与孔中抗原的浓度相关,而且和琼脂中抗体的浓度有关。
实验十七 双向琼脂扩散实验
一、原理
双向琼脂扩散实验,是将抗原和相应抗体分别加入同一凝胶板内的相邻小孔中。两者相互扩散,当扩散到他们的浓度比例合适的部位相遇时,就会形成抗原抗体复合物的沉淀。
二、操作步骤
1.取一块干净的玻璃板,用少量75%乙醇冲洗,晾干后置于水平台,将1%琼脂糖融化,56℃水浴中保温。
2.将琼脂糖铺于玻璃板上,厚度约为1㎜。
3.打孔,孔距为4㎜,
4.将抗血清按二倍稀释法稀释成1:2, 1:4, 1:8, 1:16, 1:32的不同浓度。
在周围孔中加入不同浓度的抗体,中心孔加抗原。
将凝胶板置于湿盒内,室温过夜,观察结果
三、实验结果
浓度不同,形成不同的沉淀的线。
实验十八 免疫电泳
一、操作步骤
1.取一块干净的玻璃板,用少量75%乙醇冲洗,晾干后置于水平台,将1%琼脂糖融化,56℃水浴中保温。
2.将琼脂糖铺于玻璃板上,厚度约为1㎜。凝固后,打孔。
3.在孔内加入抗原,其中一孔内加电泳指示剂。
4.将凝胶板放在电泳槽中进行电泳,确定电泳时间。
5.电泳后在凝胶板上沿电泳方向平行挖2㎜宽的长槽,加入抗血清。
二、实验结果
将凝胶板放入湿盒,室温放置12小时,可观察在到沉淀弧线。
实验十九 对流免疫电泳
一、操作步骤
1.1%琼脂糖融化后,置于56℃备用。
2.取一块干净的玻璃板,用少量75%乙醇冲洗,凉干。
3.将琼脂糖铺于玻璃板上,厚度约为1㎜。凝固后,打孔。
4.在孔内分别加入抗原和抗体,每孔5微升,抗体点阳极,抗原点阴极。
5.在电场中电泳50min,5V。
二、实验结果
在小孔中间出现沉淀线。
实验二十 火箭免疫电泳
一、操作步骤
1.取一块干净的玻璃板,用少量75%乙醇冲洗,晾干后置于水平台。
3%琼脂糖融化后,置于56℃备用。
2.将琼脂糖铺于玻璃板上,厚度约为1㎜。凝固后,打孔。
3.将抗原按倍比稀释,在孔内分别加入标准抗原和代测样品,每孔5微升。
在10V电场中电泳3小时。
二、实验结果
发现在电泳方向上有拖尾,拖尾长度与抗原浓度有关。
 

Cayman品牌代理商

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1. Cayman品牌介绍
Cayman公司成立于1980年,在过去20多年的发展过程中,始终保持着为全球科研工作者提供高质、优价研究产品的宗旨。该公司目前可以提供 2,138 多种生化和免疫试剂,涉及肿瘤、氧化
氮、神经学、凋亡、氧化性损伤、内分泌学等研究领域。非常有特色的检测试剂盒包括类花生酸类物质、游离的生物标志、环核苷、激素及氧化氮等。此外,还提供多种高质量试剂,如类花
生酸类物质、氧化氮试剂及许多相关脂质、脂肪酸、酶和抗体等。Cayman非常愿意接受各地客户的要求,合成复杂和不稳定分子。
2. Cayman重点产品
生化和免疫试剂
3. Cayman官网
http://www.caymanchem.com
4. 金畔生物代理Cayman品牌联系方式
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硫酸葡聚糖 Dextran Sulfate (DSS) - 肠炎模式动物造模试剂

硫酸葡聚糖 Dextran Sulfate (DSS) - 肠炎模式动物造模试剂
溃疡性结肠炎(UC)是一种病因和发病机制尚不十分清楚的慢性肠道炎症性疾病,建立适当的结肠炎动物模型对于研究UC的病因、发病机制以及新的治疗方法具有重要意义。人们制作了多种动物模型对其进行研究,日本学者于1985年首次应用硫酸葡聚糖制备了鼠UC模型,此后,该方法广泛用于筛选治疗炎症性肠病(IBD)的新方法和临床前新药物的开发,也用于研究IBD的发病机制。其具备以下优点:
1.DSS诱导的UC模型的病理改变与人类UC最相似;
2.此模型既可以应用于UC急性期又可应用于慢性期的研究,使实验能够完整地进行;
3.制作简便、经济、易于复制。
参考方法:
方法一:
小鼠给予含50g/L硫酸葡聚糖(葡聚糖硫酸钠)5000或40000的蒸馏水自由饮用7d,出现体重减轻、腹泻、血便等急性肠炎的表现.病理学切片HE染色发现小鼠病变结肠腺体结构紊乱,黏膜和黏膜下单核细胞和多核细胞浸润.DSS组病变肠段组织GSH表达较对照组明显减少(2±0.6 vs 3.14±1.0,t = 3.95, P = 0.01<0.05),病变结肠分泌的IL-4明显升高(38.7±4.7 vs 28.7±6.7,t = 3.16, P = 0.009<0.01),IFN-g轻度降低(P>0.05).
资料来源:《GSH在DSS诱导的小鼠实验性肠炎中的作用》
方法二:
将分子量为50 00或40000的DSS溶于饮用水,配成3% DSS溶液,让BALB/C小鼠自由饮用7d,建立小鼠急性结肠炎模型;②让BALB/C小鼠自由饮用3% DSS溶液7d,然后饮用不含DSS蒸馏水14d,建立小鼠慢性结肠炎模型;模型建立成功的标志为饮用3% DSS 7 d后出现半稀便、腹泻、大便隐血(+)和肉眼血便中的任一症状。
资料来源:《葡聚糖硫酸钠致小鼠结肠炎模型的建立与评价》。
已有研究表明,不同分子量的DSS所诱导的病变特征不同,如用5000, 40,000和500,000的DSS喂养小鼠,结果典型病变只出现于5,000组和40,000组,50,000组的病变主要见于盲肠和上段结肠,此外,DSS结肠炎的严重度并不依赖于DSS摄入量,而是由DSS浓度决定,小鼠饮用的DSS量差别较小时不影响诱导出的结肠炎严重度。再次,不同种属对于不同分子量的DSS的敏感度不一。
相关试剂:
货号 英文名 中文名 分子量 其他
184005 Dextran Sulfate,Na 硫酸葡聚糖 5000 100g
184505 Dextran sulfate,Na 硫酸葡聚糖 36,000~50,000 100g
ACJ0380A Dextran sulphate sodium 硫酸葡聚糖钠 40000 100g、500g
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Abcam品牌代理商

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1. Abcam品牌介绍
Abcam 位于英国的剑桥科学园,成立于1998年,专门生产和分销研究型抗体。我们的在线目录 (www.abcam.cn) 已有超过120,000 种抗体和试剂,并不断添加,供应予全球百多个国家。Abcam 于2005年11月在伦敦证券交易所上市,在美国、日本、香港、中国均设有分公司。
2. Abcam重点产品
生产和分销研究型抗体
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ChromaDex品牌代理商

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1. ChromaDex品牌介绍
Chromadex 公司于1999年在加拿大成立,主要生产植物化学/中草药对照品以及标准材料,是植物参考标准的创造以及植物化学物质的产品和服务的市场领导者, ChromaDex公司提供
多达3000种产品和试剂盒,满足了自然产品的参考标准品、材料、业务的需求。现在是仍然通过严谨的科学以顾客为中心发展参考标准品和业务。
Chromadex是一个生产天然产品的创新性的公司,提供专有的、科学性的溶剂和配料,它们可用于食品强化剂、食品和饮料、化妆品和制药行业。特别是,Chromadex 公司研发和销售植
物化学和植物学的参考标准品和材料。生产和销售新颖的和天然的对人类健康有积极影响的产品。凭着公司的专业的服务和严谨的科学给市场带去安全与高品质。为了满足市场对天然产品的
标准品、材料和服务不断增长的需求,Chromadex 公司在1999年应运而生。随着各种消费类产品的出现,越来越多的消费者和政府机构要求有质量保证的研究方法,
如今Chromadex公司采取以科学严谨性为支撑的消费者为中心的方式,在参考标准品这服务性行业中处于领先地位。它在市面上的专业技术赋予它独特的基础,使它可以结合科学健康的自
然力量去开发和销售天然和新颖的配料。
2. ChromaDex重点产品
植物化学/中草药对照品
3. ChromaDex官网
http://https://chromadex.com/default.aspx
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HTL品牌代理商

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1. HTL品牌介绍
波兰High Tech Lab公司生产高质量实验及临床仪器、耗材产品。该公司由两部分组成:位于Warsaw的PZ HTL S.A.生产精密测量产品;位于Ozorkow的HTL-STREFA Sp.zo.o.生产实验室耗
材及外科刀具。HTL产品通过了ISO9001质量体系认证,其中HTL Strefa Sp.zo.o.生产的医学产品符合欧盟Directive 93/42/EEC标准、并携带有CE标志,为美国食品与药物管理局(FDA)注册产
品。
HTL有20多年的精密移液器设计、生产经验,是世界上20多个品牌的移液器OEM工厂,HTL自有品牌的移液器更是在自己独有的制造水平之上博采众长,成为世界具有世界顶级品质的产品。
DISCOVERY系列移液器更是集HTL公司20多年制造经验之精华的扛鼎之作。
2. HTL重点产品
HTL有20多年的精密移液器设计、生产经验,是世界上20多个品牌的移液器OEM工厂,HTL自有品牌的移液器更是在自己独有的制造水平之上博采众长,成为世界具有世界顶级品质的产品。
DISCOVERY系列移液器更是集HTL公司20多年制造经验之精华的扛鼎之作。
3. HTL官网
http://www.htl.com.pl/
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Corning品牌代理商

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1. Corning品牌介绍
康宁公司是在生命科学实验室产品方面拥有90多年历史的全球领先开发商、制造商和供应商,对于药物研发过程中提高效率、降低成本、节约时间等方面有着突出贡献,成为众多科研人员最
为信赖的实验室伙伴。凭借在光学、材料科学、特殊表面和生物方面等多专业领域内的丰富积累,康宁的一系列革命性解决方案,提高制药业产能,并使突破性发现成为可能。
除了在生命科学研究领域作为玻璃耗材和塑料实验室用品供应的全球领导者,康宁还致力于不断研发和制造生命科学的其他产品,有康宁 Epic® 系统用于无标记探测,HYPERFlask® 细
胞培养瓶用于大规模细胞培养,新型表面如超低吸附表面和CellBIND® 表面,提高化验精度。我们仍持续满足客户独特的需求和不断变化的需求。
2. Corning重点产品
实验室耗材
培养基
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ChromaDex品牌代理商–上海金畔

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1. ChromaDex品牌介绍
Chromadex 公司于1999年在加拿大成立,主要生产植物化学/中草药对照品以及标准材料,是植物参考标准的创造以及植物化学物质的产品和服务的市场领导者, ChromaDex公司提供
多达3000种产品和试剂盒,满足了自然产品的参考标准品、材料、业务的需求。现在是仍然通过严谨的科学以顾客为中心发展参考标准品和业务。
Chromadex是一个生产天然产品的创新性的公司,提供专有的、科学性的溶剂和配料,它们可用于食品强化剂、食品和饮料、化妆品和制药行业。特别是,Chromadex 公司研发和销售植
物化学和植物学的参考标准品和材料。生产和销售新颖的和天然的对人类健康有积极影响的产品。凭着公司的专业的服务和严谨的科学给市场带去安全与高品质。为了满足市场对天然产品的
标准品、材料和服务不断增长的需求,Chromadex 公司在1999年应运而生。随着各种消费类产品的出现,越来越多的消费者和政府机构要求有质量保证的研究方法,
如今Chromadex公司采取以科学严谨性为支撑的消费者为中心的方式,在参考标准品这服务性行业中处于领先地位。它在市面上的专业技术赋予它独特的基础,使它可以结合科学健康的自
然力量去开发和销售天然和新颖的配料。
2. ChromaDex重点产品
植物化学/中草药对照品
3. ChromaDex官网
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1. TRC品牌介绍
TRC是加拿大全资公司,世界领先的有机化学品(包括碳水化学、芳香化学、氮磷硫化学、放射性同位素及同位素标记物等)制造商,建立于1982年,占地55,000平方英尺,包括研究实验室和
生产车间,主要用于生物学、医学、药学、临床诊断和试验方面的研究和生产。TRC提供生化研究的有机化学品,用于生物技术,制药,诊断。研究特殊化学品。提供从g级到kg级别的定制合
同。
2. TRC重点产品
有机化学品标准品
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