多酚氧化酶(PPO)的分离提取 DEAE-纤维素DE 52

实验一 多酚氧化酶(PPO)的分离提取 DEAE-纤维素DE 52

一、原理与目的
多酚氧化酶是植物组织内广泛存在的一种含铜氧化酶,植物受到机械损伤和病菌侵染后,PPO催化酚与O2氧化形成醌,是组织形成褐变,以便损伤恢复,防止或减少感染,提高抗病能力。醌类物质对微生物有毒害作用,所以伤口醌类物质出现是植物防止伤口感染的愈伤反应,因而受伤组织一般这种酶的活性就会提高。多酚氧化酶也可与细胞内其他底物氧化相偶联,起到末端氧化酶的作用。
PPO的存在是水果、蔬菜褐变及营养丧失的主要原因之一。PPO氧化内源的酚类物质生成邻醌,邻醌再相互聚合成醌或蛋白质、氨基酸等作用生成高分子络合物而导致褐色素的生成,色素分子量愈高,颜色愈暗。多酚氧化酶活性高低也是马铃薯解除休眠的指标之一。
本实验将采用马铃薯为主要材料,通过组织细胞破碎匀浆、过滤、离心、硫酸铵沉淀、透析等步骤获得PPO的粗酶液。
通过本项实验,学习和了解蛋白质的提取、分离的基本原理和方法,掌握相关仪器设备的操作使用,以及蛋白质的提取、分离的系统技术。
二、材料与试剂
(1)马铃薯(大约每小组100-200g)
(2)试剂:
0.03M磷酸缓冲液PH6.0(内含0.02M巯基乙醇,0.001MEDTA,5%甘油,1%的聚乙烯吡咯烷酮)配制时配×10倍的浓缩液1000ml;固体硫酸铵;0.03M磷酸缓冲液PH6.0(内含0.02M巯基乙醇,0.001MEDTA,0.005MgCL2)配置时配
(3)实验器械与仪器设备:
试管与试管架;烧杯、玻璃搅棒;移液管、滴管等;试剂瓶;透析袋;
过滤纱布;植物组织匀浆器;pH计和pH试纸;GL-20C高速冷冻离心机;
DL-7A大容量低速冷冻离心机
三、操作步骤
1:粗酶提取:
水果肉组织按1:1(W/V)比例与003M磷酸缓冲液PH6.0(内含0.02M巯基乙醇,0.001MEDTA,5%甘油,1%聚乙烯吡咯烷酮)混合,匀浆4层后纱布过滤,滤液以6000rpm离心10min,弃除沉淀获得酶提取液。
2:盐析分级沉淀:
在酶提取液中加入固体硫酸铵使其达到40%饱和度(边加边搅拌达到充分溶解),然后6000rpm离心20min弃除沉淀;离心上清液在加入固体硫酸铵达到70%饱和度(边加边搅拌达到充分溶解),再以6000rpm离心20min,弃除上清夜,收集粗酶沉淀。
四、实验结果
获得PPO粗酶液。
实验二 PPO粗酶液的纯化
一、原理
1.葡聚糖凝胶Sephadex G-200凝胶柱层析 利用大分子不能进入凝胶颗粒内部 最先流出柱外,而小分子物质进入凝胶颗粒内部,流速慢而最后流出柱外,凝胶层析法能将不同分子大小的物质分离开。(G-200能分离800-80000D分子量的蛋白质)
2.利用离子交换法,选取DEAE-阴离子纤维素DE52柱材料,因为PPO是带有阳离子的蛋白质,在层析时会吸附在柱材料上,而杂蛋白会洗下。后用NaCl梯度洗脱PPO,(NaCl为强离子交换剂,能将弱吸附在柱材料上的PPO置换下来)。粗酶液从而得到纯化。
二、材料与试剂
试剂:0.02M Tris-HCL缓冲液Ph7.4(内含0.001M EDTA)配制时配×10倍浓缩液1000ml;NaCL;聚已二醇;DEAE-纤维素DE52;葡聚糖凝胶Sephadex G-200;兰葡萄糖-40、70、100等;
实验器械与仪器设备:试管与试管架、烧杯、玻璃搅棒、移液管、滴管等;试剂瓶、层析柱、pH计和pH试纸、恒流泵、梯度混合仪、核酸蛋白监测仪、GL-20C高速冷冻离心机、DL-7A大容量低速冷冻离心机
三、操作步骤
1.葡聚糖凝胶的处理、装柱及平衡
(1)柱材处理
称取一定量的Sephadex G-200干粉,加无离子水或蒸馏水浸泡溶胀48h,去掉悬浮的细微颗粒,为防止凝胶颗粒中的空气存在,影响层析效果,凝胶装柱前一定要将凝胶液中的气体除掉,其办法是将凝胶液放进抽滤瓶中,进行抽真空处理,直到凝胶液中没有气泡出现为止。
(2)装柱
将层析柱清洗干净垂直固定到层析架上,加1/3体积的无离子水,打开下出液口,水流畅通,即刻将小烧杯中装有适宜浓度的凝胶液(凝胶的浓度过高会产生气泡,影响蛋白质分离速度,浓度过低易产生凝胶分层,影响蛋白质的分离效果)轻轻倒入层析柱中,凝胶自然慢慢沉降在层析柱底部,凝胶沉积直到离层析柱上端1.5-2cm处,停止装柱,剪一与柱内径相等的滤纸片覆盖于凝胶上。层析柱上端进液口连接恒流泵,下出液口连接蛋白质监测仪,待层析柱的平衡。
(3)平衡
在柱层析上样前必须对层析柱进行平衡,所谓平衡就是将层析柱中的溶液用层析过程的缓冲液(洗脱液)置换出来,使层析柱中的缓冲系统与柱层析过程中的系统一致。其方法是:利用层析柱上端的恒流泵将平衡缓冲液泵入到层析柱内,打开层析柱下端的出口,平衡液流速在0.5-1ml/min,当下出口流出液的PH值与平衡缓冲液的PH值一致时,层析柱达到了平衡。在本实验中,用0.002M Tris-HCL缓冲液PH7.4(内含0.0001M EDTA),平衡Sephadex G-200凝胶。
2.上样:将粗酶液上柱。
3.洗脱:用0.02M Tris-HCL缓冲液Ph7.4(内含0.001M EDTA)洗脱,收集洗脱液进行酶活性、蛋白质浓度、聚丙烯酰胺凝胶电泳分子量的基本性质分析测定。
4.DEAE-纤维素的处理及装柱
(1)处理
本实验采用的是DEAE-纤维素DE 52 是弱酸型阴离子交换剂,具体处理方法为:先将DE52阴离子交换剂干粉浸泡于蒸馏水中,去除杂质;再在0.5N的HCL溶液中浸泡1-2h,再用无离子水或蒸馏水洗至pH值中性或PH4以上,并将其在抽滤漏斗中抽干;将抽干的离子交换剂浸泡在0.5N的NaOH溶液中1-2h,再用无离子水或蒸馏水将其洗至中性。
(2)装柱
将层析柱清洗干净垂直固定到层析架上,加1/3体积的无离子水,打开下出液口,水流畅通,即刻将小烧杯中装有适宜浓度的柱材,轻轻倒入层析柱中,凝胶自然慢慢沉降再层析柱底部,凝胶沉积直到离层析柱上端1.5-2cm处,停止装柱。层析柱上端进液口连接恒流泵,下出口连接蛋白质监测仪,待层析柱的平衡。
(3)平衡
在柱层析上样前必须对层析柱进行平衡,所谓平衡就是将层析柱中的溶液用层析过程的缓冲液(洗脱液)置换出来,使层析柱中的缓冲系统与柱层析过程中的系统一致。其方法是:利用层析柱上端的恒流泵将平衡缓冲液泵入到层析柱内,打开层析柱下端的出口,平衡液流速在0.5-1ml/min,当下出口流出液的PH值与平衡缓冲液的PH值一致时,层析柱达到了平衡。在本实验中,用0.002M Tris-HCL缓冲液PH7.4(内含0.0001M EDTA),预先将DE-52柱进行平衡。
5.上样:
将洗脱酶液上样,用0.02M Tris-HCL缓冲液pH7.4(内含0.001M EDTA)洗脱杂蛋白。
6.洗脱:
用含NaCL(0.2-0.6M)的0.02M Tris-HCL缓冲液pH7.4(内含0.001M EDTA)进行梯度洗脱。
7.测定酶活性和蛋白质浓度
实验三 PPO活性测定
一、原理与方法
PPO催化各种酚与O2氧化为醌。本实验是采用邻苯二酚为底物,在0.2M磷酸氢二钠-0.1M柠檬酸缓冲液PH5.8的反应体系中,PPO催化邻苯二酚形成褐色的醌,在分光光度计410nm处使反应体系的OD值产生变化,通过OD值上升的读数变化确定PPO的酶活大小。
其方法是:在含有4mlPH5.8的0.2M磷酸氢二钠-0.1M柠檬酸缓冲液试管中加入0.05ml0.05M邻苯二酚溶液,在30℃恒温水浴中预热后加入0.05ml酶液,反应5分钟,在分光光度计410nm处读取吸光值。在上述条件下,以A410读数,以每分钟增加0.01O.D.值定义为一个酶活性单位(U)。
二、仪器与试剂
(1)样品:
多酚氧化酶粗酶液
硫酸铵沉淀组分
DE-52洗脱组分
葡聚糖凝胶洗脱组分
(2)底物:
邻苯二酚:O.01M邻苯二酚溶液
(3)反应体系:
0.2M邻酸二氢钠-0.1M柠檬酸缓冲液PH5.8
(4)器皿与仪器:
试管、恒温水浴等
分光光度计
三、酶蛋白的比活性
比活性=酶活单位(U)/mg蛋白质
四、实验结果与分析
1. Sephadex G-200的洗脱组分的相对浓度(OD590)和相对酶活(OD410)
结果列表
试管号 蛋白质浓度 PPO酶活 试管号 蛋白质浓度 PPO酶活
空白 0 0 3 0.16 0.09
粗酶液 0.20 0.14 4 0.03 0.03
1 0.00 0.01 5 0.03 0.01
2 0.13 0.09 6 0.02 0.02
分析:2和3试管中含绝大部分所需蛋白,保存进行下一步纯化。
2. DE-52的洗脱组分的相对浓度(OD590)和相对酶活(OD410)
结果列表
试管号 蛋白质浓度 PPO酶活 试管号 蛋白质浓度 PPO酶活
空白 0 0 3 0.03 0.05
粗酶液 0.22 0.16 4 0.09 0.05
1 0.00 0.00 5 0.07 0.02
2 0.03 0.02 6 0.03 0.00
分析:酶活性高低不一定与蛋白含量高低成正比,3和4试管中含较多所需蛋白。
实验四 胰酶分离提取
一、原理与目的
提取制备酶的经典方法,多采用硫酸铵分级沉淀,胰酶在75%饱和度硫酸铵中沉淀,其它杂蛋白一般在10%硫酸铵饱和度下被沉淀而除去。经此多次提取,最后在PH8.0硼酸缓冲液中得到结晶。
胰酶在PH3.0时最稳定,可在低温下储存较长的时间而不失活;低与此PH酶易变性;高于PH5时,酶易自溶而失活。因此提取制备胰酶的全部操作过程应在低温和低PH下进行。胰酶以无活性的酶原形式存在于动物的胰脏中。胰蛋白酶原在正常生理条件下可被肠激酶和钙离子所激活或自我环化成为有活性的酶。猪胰蛋白酶原分子量约24000-25000,而猪胰酶分子量为23400。在酶原活化的过程中,酶原N端Lys与Ile之间的 一个肽链被断裂,丢失一个6肽,分子构象发生改变,PI变成10.8。
本实验拟通过从猪胰脏中制备胰酶结晶实验,掌握酶的制备、一般分离、提取、纯化和结晶的操作技术。同时为亲和层析、免疫学实验准备实验样品。
二、材料与试剂
1.仪器
紫外光分光光度计、恒温水浴、离心机、组织捣碎机、PH计、显微镜、秒表、剪刀、镊子、搪瓷盆、乳钵、大玻璃漏斗、抽滤瓶,塑料小桶、纱布、PH试纸,滤纸、玻璃器皿等。
2.材料:新鲜猪胰脏
3.试剂及溶液配制
pH2.5乙酸酸化水、2.5M H2SO4溶液、2M.NaOH溶液、5M NaOH溶液、01M HCL溶液、0.025M HCL溶液、0.01M HCL溶液、0.4M pH9.0硼酸缓冲液(母液为0.8M,用时稀释一倍)、Tris、硫酸铵。
0.8M pH9.0硼酸缓冲液:取20ml0.8M四硼酸钠溶液,混合后用PH计校正。
三、操作步骤
1.胰蛋白酶原的提取与分离:
(1)称取1-1.5Kg新鲜猪胰脏,在冰浴下剥除脂肪和结缔组织,在低温下用绞肉机绞碎胰脏(或用高速组织匀浆机捣碎)加1-2倍体积以预冷却的PH2.5-3.0乙酸酸化水溶液提取(按1g组织相当于1ml体积计算,以此类推)。检查提取液中PH,若高于PH3.0时应及时用10%乙酸调节,使提取液维持PH2.5-3.0之间。在冷室5℃左右搅拌提取18-24h,而后用4层纱布过滤,尽量拧挤出滤液,滤液呈乳白色,用约300mlpH2.5乙酸酸化水再提取残渣一次(时间约为1-2h),合并滤液,此时滤液PH值较高,可用5M H2PO4溶液调整PH至2.5-3.0,放置 3-5h后,浑浊滤液冷却后,用玻璃漏斗进行自然过滤,滤液呈黄色透明液体,收集滤液,量其总体积,弃去沉淀物。
(2)盐析:滤液加固体粉状硫酸铵进行盐析,使溶液至75%饱和度。盐析溶液放冷室中过夜,次日用4000r/min离心机离心,或用布氏漏斗抽滤,滤饼经压干后称重,可得约20g胰蛋白酶原粗制品。
(3)胰蛋白酶原得激活:将胰蛋白酶原粗制品用10倍体积得冷蒸馏水,分多次加入使滤饼溶解,溶液呈乳白色,量其体积,取出1ml溶液用于测定,溶液中硫酸铵得含量(约为滤饼重得1/4)。因为硫酸铵可以与活化剂钙离子结合,生成硫酸钙,如果钙离子过少会直接影响胰酶原的激活过程,按浓度量计算,将已研细的固体CaCL2慢慢加入酶原溶液中,边加边搅拌均匀。用5MNaOH溶液调PH至8.0。在酶溶液加入约5mg结晶猪胰蛋白酶,轻轻搅拌均匀,置5℃冰箱中使酶原活化。
(4)纯化:去除杂蛋白,量取胰蛋白酶溶液体积后,用5M硫酸溶液调节滤液PH至2.5-3.0,抽滤除去硫酸钙沉淀,滤液体积约1000ml,加入已经研细的硫酸铵粉末,使其溶液达40%饱和度(每升滤液加242g硫酸铵)。放置5℃冰箱中5-8h,抽滤除去沉淀。
实验五 卵清蛋白分离提取
一、实验目的与原理
鸡卵粘蛋白存在于鸡蛋清中,对胰蛋白酶有强烈的抑制作用,高纯度的鸡卵粘蛋白抑制胰蛋白酶的分子酶的分子比为1:1。鸡卵粘蛋白在中性或酸性溶液中对热和高浓度的脲都是相当稳定的,而在碱性溶液中较不稳定。
由于鸡卵粘蛋白对胰蛋白酶有强烈的抑制作用,因此可以用鸡卵粘蛋白做亲和配基配制纯化胰酶的亲和材料。
二、材料与试剂:
1.材料:新鲜鸡蛋2只
2:仪器:抽滤瓶500-1000ml、烧结漏斗、移液器、磁力搅拌器
3:试剂:
10%TCA,用固体NaOH调调PH至1.05-1.10,需要50ml、5N HCL、5N NaOH、冷丙酮、胰蛋白酶液、BAEE-0.05M,PH8.0Tris-HCL缓冲液(每ml含0.34BAEE和2.22mgCaCL2),50ml
pH8.0,0.1M Tris-HCL缓冲液
三、操作步骤
1,取两只新鲜鸡蛋,得蛋清50ml,置于烧杯中,外用温水浴25℃-30℃,在不断搅拌条件下,缓慢加入等体积得三氯乙酸-丙酮(1:2V/V),立即出现大量白色絮状沉淀,加完后最终PH约3.5,再继续搅拌30min,然后在4℃冰箱中放置过夜。
2,次日用布氏漏斗抽滤,得黄绿色清液。
3,边搅拌边加入4℃预冷的丙酮200ml沉淀蛋白,在4℃放置2h之后将上清液小心倒入瓶中回收,下部沉淀部分于4000rpm离心5min,收集沉淀。
4,将沉淀溶于10ml无离子水中,对无离子水(50倍)透析4h,换水两次,再对碳酸钠缓冲液透析过夜,4000rpm离心10min ,去除不溶物。
实验六 亲和层析纯化胰酶
一、实验目的与原理
生物大分子化合物的重要特征之一是具有与某些相对应的分子通过次级键或共价键专一结合的能力即亲和力。例如酶与抑制剂之间,抗原与抗体之间,结合的双方不仅是专一的,而且结合以后可以在不丧失生物活性的基础上用物理或化学的方法进行解离。根据这一特性,如果把具有亲和力的一对分子的某一方连接于水不溶的固体载体上作为固定相,那么另一方随着流动相流经该固定相的时候,双方便亲和结合为一个整体。然后只有改变某种物理条件或化学条件使结合的双方解离,即能得到于固定相有特异亲和力的某一特定物质。这种利用生物分子和相对应分子之间亲和结合和解离性质而建立起来的层析方法称之为亲和层析。
本实验通过将胰蛋白酶抑制剂(protease inhibitor)(protease inhibitor)(protease inhibitor)-鸡卵粘蛋白与Sephadex-G75偶联及亲和层析纯化胰酶的操作,以了解亲和层析的基本原理,掌握亲和柱材活化偶联及亲和层析操作的基本过程和技术。
二、仪器与试剂
1.鸡卵粘蛋白制备
2.Sephadex-G75的活化和偶联
2.5g干重的葡聚糖凝胶Sephadex-G75 、0.05M NaCL溶液 50ml、纯化的鸡卵粘蛋白87.5mg、 5% K2CO3、0.27gKBH4 (溶于20ml水)
3.亲和层析
0.1M Tris-HCL pH7.5(含0.5M KCL,0.05M CaCL2) 200ml、粗胰蛋白酶约50ml 、0.1N甲酸钾、0.5M KCL pH2.5 100ml
仪器器材:抽滤瓶500-1000ml、层析柱、紫外分光光度计、紫外蛋白检测仪、烧杯漏斗、移液管、磁力搅拌器
三、操作步骤
1、鸡卵粘蛋白的制备
2、Sephadex-G75的活化及偶联
2.5g干重的葡聚糖凝胶Sephadex-G75溶胀洗涤数次,缓慢搅拌,加入0.05M NaCL溶液50ml ,30min,蒸馏水洗涤数次,抽干备用,活化凝胶,纯化的鸡卵粘蛋白87.5mg 溶于35ml水,加入活化葡聚糖凝胶,75%K2CO3,调pH7.5-9.0,缓慢搅拌3h。反应过程随时加入5%K2CO3,以维持pH的稳定。0.27gKBH4 溶于20ml水,缓慢搅拌加入上述体系反应5h,pH维持在6.5-7.5,洗涤。
3、胰蛋白酶的亲和层析
卵类粘蛋白在pH7-8的条件下能与胰蛋白酶专一地结合,而在pH2-3时又能解离,因而掌握好上柱地PH条件和洗脱缓冲条件,便可将胰蛋白酶从含杂蛋白地粗酶液中选择性地结合于柱上,待洗去不结合或非专一性结合地杂蛋白后,改变PH值便可将胰蛋白酶洗脱下来。从而达到纯化地目的。由于亲和层析结合地专一性,上柱体积可以比较大,得到浓缩的提纯产品。
(1)亲和层析
将鸡卵粘蛋白-Sephadex-G75装柱(1×10cm),用pH7.5,0.1M含 0.5M KCL,0.05M CaCL2的缓冲液平衡,平衡约2-3倍的柱体积。将粗胰酶液上柱层析。用紫外蛋白监测仪280nm处检测蛋白质吸收峰,随着上柱和流出的杂蛋白量的平衡,吸收峰达到稳定,一旦上柱的胰蛋白酶量超过柱的负荷时,则胰蛋白酶溢出,使吸收峰升高,此时应停止样品上样,改用pH7.5的平衡缓冲液冲洗出杂蛋白,待洗出液的吸收回到基线后,改用0.1N的甲酸钾0.5M KCL,Ph2.5的洗脱液解析,柱的流速维持在1.5ml/min左右,收集洗脱下来的蛋白峰蛋白,测总蛋白量及比活性,并根据上柱样品的总蛋白量和比活性计算经亲和层析后胰蛋白酶比活性提高的倍数,总蛋白回收率,胰蛋白酶量。
当胰蛋白酶峰洗出,待紫外吸收回到基线后,重新用缓冲液平衡,亲和层析柱可以反复使用。
(2)胰酶蛋白和活性测定

 

上海金畔生物科技有限公司提供 T细胞分离用尼龙毛柱

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在研究体内及体外的免疫系统时,分离淋巴细胞群是一个关键步骤。因为现在市场上并没有针对B细胞的特异性抗血清,所以分离淋巴细胞中的T细胞并不是十分方便。T细胞尼龙毛分离法利用了尼龙毛对B细胞的亲和力,从而使T细胞在没有严重损伤的情况下达到的足够的纯度。因为这个方法不像流式和磁珠费用昂贵,而且操作简便,所需要的条件也不高,是一种非常实用的方法。
首先要指出的是实验中所使用的是分离T细胞专用的尼龙毛(Nylon Fiber),不是化工上的尼龙纤维,曾经有人问过我这种问题,如果你买错了,可是做不出来的!
现在市面上有尼龙毛填料,也已经有了商品化的尼龙毛柱子,这两者的区别主要是以下两点:1.商品化的柱子的填料量是已经定好的,有一个确定的上样量范围。而自己买填料装柱可以控制填料量,也就是可以控制上样量,这对于样本量非常少,或是样本量非常大的实验需求非常合适。2.商品化的柱子已经经过了无菌处理(一般是辐射灭菌),而自己装柱当然就要自己灭菌了。
操作方法:
1.秤取1.5g尼龙毛装入20-30ml玻璃容器或注射器内(要可以灭菌的),填料的体积控制在15毫升左右(注射器上有标记,所以还是比较好控制的),因为尼龙毛的松紧关系到T细胞的回收率,所以要特别注意。注射器下端配接5厘米左右长的带有弹簧夹的橡皮管。
2. 加入大量的PBS平衡柱子后,用铝箔包裹,并置于适当的容器内,高压灭菌15分钟。
(商品化尼龙毛柱以上步骤可以省略,经过PBS平衡后可以直接进行下列步骤。)
3. 灭菌的尼龙毛柱垂直固定后放于超净台内,顶部以铝箔覆盖,避免污染。
4. 注射器下端,橡皮管,弹簧夹用无水酒精消毒。打开弹簧夹调节流速在大约3-4ml/min。
5.首先,加入3-4倍柱体的无血培养基平衡,之后加入相同体积的含有血清的培养基平衡(上述培养基都要预热),最后等培养基液面接近柱填料液面时,关闭弹簧夹。
6. 样本细胞悬浮液浓度控制在约5×108cells/ml,上样量一般是1/3-1/5柱体积。样品加入之后,再加入少量培养液,然后关闭弹簧夹。
7.覆盖铝箔,垂直固定,置于消毒过的容器中,于培养箱内37℃孵育1小时。此过程中柱子必须要保持垂直状态。
8. 从培养箱中拿出柱子,置于超净台内,除去铝箔。接上按照4.中的方法消毒的弹簧夹和橡皮管,加入适当体积经37℃预热的培养基,打开弹簧夹控制流速在3-4 mL/min,流出约5ml之后,流出的培养液基变得不透明,此时其中含有T细胞,收集这一部分培养基。
9. 基本上何时结束收集取决于流出液体中细胞的浓度,实际上,收集的量达到一个柱体积时就可以停止收集,因为即使收集更多的量,回收率几乎不会增加。
10 .上述操作后,实验结果如下:
细胞的回收率为: 15~20 %
T细胞含量: 85~95 %
B细胞污染率: 1 5 %
多数细胞被确定为T细胞。
(注)收集粘附于尼龙毛上的细胞时,将T细胞收集完毕后的尼龙毛再无菌操作的状态下取出,转移到适当的容器中,用镊子小心的将尼龙毛松开,粘附的细胞可以洗到培养基中。或者将注射器芯插入注射器内,通过压力使的粘附的细胞随着液体流出。
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37度支原体衣原体培养箱技术参数
型号           有效容积        控温范围        箱体尺寸
FYL-YS-50L       50L        4-38°C      430×480×515mm
FYL-YS-100L      100L       4-38°C      480×490×840mm
FYL-YS-138L      138L       4-38°C      540×550×840mm
FYL-YS-430L      430L       2-48°C      595×680×1805mm
FYL-YS-230L      230L       2-48°C      595×590×1215mm
FYL-YS-310L     310L        2-48°C      595×695×1315mm
FYL-YS-150L     150L        2-48°C      595×570×865mm
FYL-YS-280L     280L       2-48°C      595×570×1445mm
FYL-YS-151L   150L     0-100℃    595×565×860mm
FYL-YS-281L   280L     0-100℃    595×565×1440mm
FYL-YS-431L   430L     0-100℃    595×675×1795mm
 
 
 
37度支原体衣原体培养箱特征
专业设计
专业微电脑控制,数字显示;
双向调节,高精度控制温度;
嵌入式设计,节省使用空间
聚氨酯发泡,重量轻保温好
多重安全
安全门锁,随意开启;
故障监控、高低温报警等;
自动化霜,精准温感探头
人性设计
三层钢化玻璃门,安全无凝露;
不锈钢搁架,间隔高度可调整;
宽电压带,适合电压不稳地区
内设照明灯,存取物品一目了然
稳定运行
环保压缩机,强效制冷 陶瓷加热,
升温均衡 风冷无霜、静音环保;
新型风道,温度均匀 名牌风机,稳定可靠。
 
 
 
售后服务承诺:
福意联本着“高质量,优服务,求发展”的精神,以“优质产品、合理价格、贴心服务”的理念和负责、公开的原则向您郑重承诺:
一、我方确保按合同参数的设备配置和价格供货。
二、质量保证:我方提供设备全部为全新设备(包括零部件),且设备的各零部件是产品出厂时的原始配置,设备质量符合国家质量检测标准,我方提供的设备全部都有相关国家或行业认证证书。
三、包装:我方提供的设备将严格按照标准包装完好,并承诺完全无损的运抵指定现场。由于包装不善所引起的货物锈蚀、损坏和损失均由我方承担。
四、验收:我方承诺所供设备开机正常,随机的备品、备件、手册和相关资料齐全。验收过程中如出现问题,我方将严格按照国家“三包”政策执行。
 
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上海金畔生物科技有限公司
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HTL移液器系列 Discovery系列移液器

  • HTL简介:
    波兰High Tech Lab公司生产高质量实验及临床仪器、耗材产品。该公司由两部分组成:位于Warsaw的PZ HTL S.A.生产精密测量产品;位于Ozorkow的HTL-STREFA Sp.zo.o.生产实验室耗材及外科刀具。HTL产品通过了ISO9001质量体系认证,其中HTL Strefa Sp.zo.o.生产的医学产品符合欧盟Directive 93/42/EEC标准、并携带有CE标志,为美国食品与药物管理局(FDA)注册产品。
    HTL有20多年的精密移液器设计、生产经验,是世界上20多个品牌的移液器OEM工厂,HTL自有品牌的移液器更是在自己独有的制造水平之上博采众长,成为世界具有世界顶级品质的产品。DISCOVERY系列移液器更是集HTL公司20多年制造经验之精华的扛鼎之作。
    内容介绍

    Discovery系列移液器特点:
    1、 单道移液器和多道移液器均可以整支高温消毒。(121℃0.1MPa条件下消毒20分种)。10次灭菌内无需校准。
    2、 人体工程学的精湛设计,自然地握持手柄和操作,无需大力。无论是设定容量,移液或是排卸吸嘴,整个过程动作顺畅,适合每天进行的日常工作。
    3、 单道移液器和多道移液器容量调整由原来的一点调整改为二点调整,避免在调整容量过程中夹掩手套。揿钮有左右各3mm的自由行程,吸、排液时不会改变已设定吸取量。
    4、 多道移液器吸嘴套筒可以伸缩,这样可使各个通道受力均匀,安装吸嘴时不用左右摇晃,即可保证各个吸嘴均匀的安装在移液器上。
    5、 1000uL以上量程移液器活塞采用特殊陶瓷材料制成,可抗腐蚀,耐酸碱,延长移液器活塞使用寿命。
    6、 弹射器设计长短可调(见右图),不仅使移液器兼容不同品牌的吸嘴,也使排卸吸嘴时格外轻松。大容量移液器(DV5000及DV10000)也同样装有弹射器。—每支移液器均随包装附有3只内部长短不一的H型弹射器适配头,通过更换适配头来改变弹射器的整体长度。
    7、 每支移液器均配有支架及校准工具,用户可以在实验室自行校准移液器。
    8、 更加符合GLP规范,吸液按扭及弹射器按钮都有明显色标,与型号及备用的吸嘴相符。
    9、 HTL移液器任何一个细小的零部件均由波兰HTL公司原厂生产。
    10、各种型号的移液器均通过ISO9001质量认证,并提供 3年质量保证。
    移液器的精确度和精密度除了与移液器自身品质相关外,还和使用的吸头的品质有关。下表是Discovery移液器的吸头配套参数
     

    型号
    目录号
    测试量(ul)
    精确度 (%)
    精密度 (%)
    适用吸头
    DV2
    0.1-2ul
    4301
    0.2
    ±12.0
    ±6.0
    10ul
    1.0
    ±2.7
    ±1.3
    Max
    2.0
    ±1.5
    ±0.7
    DV10
    0.5-10ul
    4302
    Min
    0.5
    ±4.0
    ±4.0
    5.0
    ±1.0
    ±0.8
    Max
    10.0
    ±0.5
    ±0.4
    DV20
    2-20ul
    4303
    Min
    2
    ±3.0
    ±1.5
    200ul
    10
    ±1.0
    ±0.7
    Max
    20
    ±0.8
    ±0.3
    DV50
    5-50ul
    4307
    Min
    5
    ±2.5
    ±2.0
    25
    ±1.0
    ±0.6
    Max
    50
    ±0.8
    ±0.4
    DV100
    10-100ul
    4304
    Min
    10
    ±1.6
    ±0.8
    50
    ±1.0
    ±0.4
    Max
    100
    ±0.8
    ±0.3
    DV200
    20-200ul
    4305
    Min
    20
    ±1.2
    ±0.6
    100
    ±1.0
    ±0.3
    Max
    200
    ±0.6
    ±0.2
    DV250
    50-250ul
    4300
    Min
    50
    ±1
    ±0.4
    300ul
    125
    ±0.8
    ±0.3
    Max
    250
    ±0.6
    ±0.3
    DV1000
    200-1000ul
    4306
    200
    ±0.8
    ±0.4
    1000ul
    500
    ±0.7
    ±0.25
    Max
    1000
    ±0.6
    ±0.15
    DV5000
    1000-5000ul
    4308
    Min
    1000
    ±0.6
    ±0.3
    5000ul
    2500
    ±0.6
    ±0.3
    Max
    5000
    ±0.5
    ±0.2
    DV10000
    1000-10000ul
    4309
    Min
    1000
    ±2.5
    ±0.6
    10000ul

     
    订货信息
     

    产品编号 产品内容 规格
    4301 单道可调精密移液器 0.1-2ul
    4302 单道连续可调精密移液器 0.5-10ul
    4303 单道连续可调精密移液器 2-20ul
    4307 单道连续可调精密移液器 5-50ul
    4304 单道连续可调精密移液器 10-100ul
    4305 单道连续可调精密移液器 20-200ul
    4300 单道连续可调精密移液器 50-250ul
    4306 单道连续可调精密移液器 100-1000ul
    4308 单道连续可调精密移液器 1-5ml
    4309 单道连续可调精密移液器 1-10ml
    5221 8道连续可调精密移液器 1-10ul
    5222 8道连续可调精密移液器 5-50ul
    5223 8道连续可调精密移液器 20-200ul
    5224 8道连续可调精密移液器 50-300ul
    5225 12道连续可调精密移液器 1-10ul
    5226 12道连续可调精密移液器 5-, 50ul
    5227 12道连续可调精密移液器 20-200ul
    5228 12道连续可调精密移液器 50-300ul
    20 连续加样器MiniLab201 0.05-50ml
    302 移液管电动助力器SwiftPet 0.1-100ml

     

FastPrep®快速核酸提取仪–上海金畔生物

上海金畔生物提供FastPrep®快速核酸提取仪,并提供配套的FastPrep®试剂盒

 产品介绍:
产品规格: 产品品牌: MP Bio
参考价格:: 询价  
详细说明:
FastPrep®快速核酸提取仪是一种特殊的、快速的、高效率的、多试管的一致系统。它与配套的FastPrep®试剂盒一起使用,就能将任何来源(包括土壤、植物和动物的组织/器官、细菌、酵母、真菌、孢子、古生物标本等)的原始DNA、RNA和蛋白质进行提取和纯化。
FastPrep®  系统与目前已有的其它样品制备方法相比,具有通用性广、高效灵活的优点。该系统避免了研磨、匀浆、超声波处理等传统方法的费力、耗时、低效等诸多缺点,可以高效、快速、稳定地裂解并纯化各种类型样品的核酸与蛋白。优 点:
使用方便:BIO  101®系列产品是FastPrep®系统的最新版本,可同时处理1-24个样品。它采用快速8字形振荡方式,配合研磨粉,可以高效充分地破碎样品。
提取时,只要将样品与适量缓冲液加入预先装有研磨粉的抗冲撞2ml管中,一次可以处理1-24个管,将各个管放入仪器固定好,选择好振荡速度与振荡时间后按run启动。在很短时间内,样品就处理完毕,而这一过程中几乎没什么噪音,方便、可靠、稳定、高效、快速地裂解样品。与耗时、费力、不可靠的传统方法相比,BIO  101®的FastPrep®系统是最理想的选择。
快速高效:高质量样品的关键在于快速、高效率的裂解。FastPrep®  系统的样品裂解在40秒内完成,最大限度的避免核酸的降解和蛋白的解离。不产生热量,几乎无对核酸和蛋白质的破坏作用。
专利设计的“8字型”轨迹振荡:
FastPrep®  系统的的运转部分采用专利保护的快速、垂直的振荡,其运动轨迹类似于“8”字。这保证了样品被全方位地充分破碎,在极短时间里彻底破碎难以裂解的样本,提高样品得率。而其他自动核酸/蛋白质提取系统无法作到充分破碎,样本的裂解效率低,直接影响了样品的得率。
维护简单:
仪器的设置简单明了
采用更先进的扣锁保护装置,固定样品管更方便
系统不需要其它附件,避免交叉污染,无需实验前再进行清洗整理工作
长寿命设计:
先进的扣锁保护装置,避免误操作对仪器造成损坏
采用更耐用的材料制造
外形设计更小巧坚固
金属支架替代了S-挂钩
配套支持系统全面灵活:
DNA、RNA、蛋白质的分离纯化都可以完成
可以处理各种不同类型的样品
提供技术支持与技术咨询
经济方便的选择
快速可靠的混匀方法
FastPrep®  FP100A  Instrument  (100  Volt)
FastPrep®  FP120A  Instrument  (120  Volt)
FastPrep®  FP220A  Instrument  (220  Volt)
以上三款每次最多可处理12个样品,各位老师可能用过FastPrep®  FP120A(指定美洲销售),但是我们亚洲只销售FastPrep®  FP220A
技术参数如下:
控制面板   程序运行时间与速度,大LED显示界面
时间 范围:1-45秒,在这范围内以1秒为单位增加
振荡速度 4.0-6.5m/s,以0.5m/s增加
加速   在2秒内达到最大速度
减速 在2秒内完全停止运行
等待时间 45秒后需要停止5分钟
结构 铝质样品座、聚苯乙烯刹车片、化学惰性表面
外形 28.0  cm宽×40.0  cm长×30.5  cm高
重量 16.3  kg
电源要求   230  V  AC,  50/50  Hz,  5  A
安全性 符合CSA与CE标准
国际认证:   ISO  9001-1994.  Registered  by  QMI  (Quality  Management  Institute).Certificate  number  001080
FASTPREP®-24  INSTRUMENT是FastPrep®  最新版本,在原有的技术基础上做个进一步的改进,能够在更短时间内获得您所需要的样本,单次可提取的样本更多,达到24个,更容易清洗,可以最大限度为您的实验节省时间。
主要技术参数:
控制面板   程序运行时间与速度,大LED显示界面
时间 范围:1-60秒,在这范围内以1秒为单位增加
振荡速度 4.0-6.5m/s,以0.5m/s增加
加速   在2秒内达到最大速度
减速 在2秒内完全停止运行
等待时间 60秒后需要停止1分钟
结构 铝质样品座、聚苯乙烯刹车片、化学惰性表面
外形(椭圆) 33.0  cm宽×42.5  cm长×27.0  cm高
重量 17.5kg
功率要求   90-250VAC,50/60HZ,1,200w.
安全性 符合UL与CE标准

上海金畔生物科技有限公司供应MP Biomedicals公司FastPrep® 24 Instrument仪器配套试剂盒。
部分产品列表如下:

供应商 产品编号 产品名称 规格
Qbiogene 6002-500 FastPrep® 24 Instrument  仪器 100-230V
Qbiogene 6560-200 FastDNA® SPIN Kit For Soil (用于提取土壤或者其它环境样品DNA) 50 preps
Qbiogene 6540-800 FastDNA® SPIN Kit For Plant and Animal Tissues (用于提取植物/动物组织样品DNA) 100 preps
Qbiogene 6540-400 FastDNA® Kit  (用于提取植物/动物/细菌/酵母/真菌/藻类样品DNA) 100 preps
Qbiogene 6540-600 FastDNA® SPIN Kit   (用于提取植物/动物/细菌/酵母/真菌/藻类样品DNA,离心柱型) 100 preps
Qbiogene 6070-050 FastRNA® Pro Soil-Direct Kit   (用于提取土壤环境样品总RNA/土壤) 50 preps
Qbiogene 6075-050 FastRNA® Pro Soil-Indirect Kit   (用于提取土壤环境样品总RNA/土壤悬浮液) 50 preps
Qbiogene 6035-050 FastRNA® Pro Red Kit (Yeast & Fungus)  (用于提取酵母/真菌样品总RNA) 50 preps
Qbiogene 6045-050 FastRNA® Pro Green Kit (Plant & Animal)   (用于提取植物/动物样品总RNA) 50 preps
Qbiogene 6025-050 FastRNA® Pro Blue Kit (Bacteria)  (用于提取革兰氏阳/阴性菌样品总RNA) 50 preps
Qbiogene 6550-400 FastProtein™ Blue Matrix   (用于细菌细胞的高效裂解以释放其中重组蛋白质) 50×2 ml
Qbiogene 6550-500 FastProtein™ Blue Matrix   (用于细菌细胞的高效裂解以释放其中重组蛋白质) 100×2 ml
Qbiogene 6550-600 FastProtein™ Red Matrix   (用于酵母细胞的高效裂解以释放其中重组蛋白质) 50×2 ml
Qbiogene 6550-700 FastProtein™ Red Matrix   (用于酵母细胞的高效裂解以释放其中重组蛋白质) 100×2 ml
Qbiogene 6914-050
6914-100
6914-500
Lysing Matrix E  (预装有研磨粉的抗冲撞管,管中有1.4mm的陶质小球、0.1mm的小硅球和一个4mm的玻璃珠。用于土壤或环境生物学研究中各种样品的DNA/RNA分离) 50×2 ml tubes
100×2 ml tubes
500×2 ml tubes

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ABI 7000,ABI Prism 7000

上海金畔生物科技有限公司提供ABI 7000,ABI Prism 7000

ABI 7000,ABI Prism 7000
现货供应ABI 7000定量PCR仪。
现货供应ABI 7500 FAST、ABI 7300、ABI 7900HT、ABI 7000、Bio-Rad IQ5、iCycler、Mx3005P、Mx3000P、LightCycler 480等多种型号荧光定量PCR仪。
上海/北京两地现货。一年保修期(配件全包),提供终身维修服务。
ABI 7000型荧光定量PCR仪的主要特点:
高度的实用性 ABI Prism® 7000型荧光定量PCR仪操作更快捷、更方便
多色荧光检测
实时数据监控
熔解曲线实时显示分析
简化的等位基因型判定(用于 SNPs分析)
阴性/阳性结果自动判定
节省空间的设计
突出的精确度和准确度
7000型荧光定量PCR仪采用精确的光学原理和复杂的多组分算法,可准确地检测和处理PCR指数级扩增的数据,得出高精度高重现性的Ct值(Ct值与起始拷贝数有线性关系)。
性能可靠
7000型荧光定量PCR仪的装机指标:使用TaqMan®的RNase P仪器检测板,7000型荧光定量PCR仪能够区分5,000和10,000的模板拷贝数的差异,其置信度可达99.7%
多色荧光检测系统
在反应过程中,7000型序列检测系统的96个样本孔被卤钨灯激发,产生的荧光通过光学滤镜到达CCD照相机,通过过滤轮能够有效地分辨包括FAM™/SYBR® Green I, VIC™/JOE™, TAMRA™,和ROX™
在内的多种荧光染料。多色荧光检测技术可实现多重定量、SNPs基因型分型和带有内部阳性对照的阴/阳性分析成为可能。
两种可选的化学试剂
ABI Prism® 7000型序列检测系统兼容两种化学试剂:
采用TaqMan® 探针的5”核酸酶检测方法可以提供优越的灵敏度和特异性,并且能实现多重反应。
对于靶基因鉴定或少量反应时,SYBR® Green I 染料是一种理想的化学试剂。
无需优化的反应设计
不管你选择何种化学试剂,7000型荧光定量PCR仪的分析指导方针能有效节省时间,并提供可靠的结果。不同靶基因无需分别优化扩增体系和参数,分析指导的基本组件包括:
Primer Express®软件提供自动的引物和探针设计
TaqMan® 和SYBR® Green I Master Mixes简化PCR加样
多种温度循环参数使你能在同一个样品板中进行不同的样品检测
缺省的引物和探针浓度设定无需分析优化
7000型荧光定量PCR仪的多种应用
1.绝对定量 通过测量样本的Ct值和采用标准曲线,可定量分析未知样品的起始拷贝数。标准曲线是通过计算稀释的已知拷贝数样本的Ct值而得出的。
2.相对定量 相对定量分析通过一个标准样本来计算表达水平,而不是使用标准曲线。使用内源性的对照来校正样品的加样量。
3.高分辨的SNP检测 7000型荧光定量PCR仪还能利用多色荧光检测单核苷酸多态性(SNPs)。
3.阴/阳性分析(终点分析) 使用内部阳性对照(IPC),7000型荧光定量PCR仪可进行阴/阳性分析。由于每个待检测样品中都加入阳性对照品,可以有效防止假阴性的结果。
系统组成
1.7000型序列检测仪
l 半导体PCR仪
l 卤钨灯光源
l 四方位的滤镜轮和CCD照相机进行荧光检测
2.笔记本电脑
Pentium Ⅲ 1.0GHZ处理器,256MB内存,20GB硬盘,CD-RW,15英寸UXGA彩色显示器,Windows®2000操作系统。
3.定量PCR仪软件
l 软件运行于Windows?2000操作系统环境下,可进行指令控制、数据收集及数据分析。
安装说明
在使用TaqMan®的RNA合成酶P仪器安装板的情况下,7000型序列检测系统能够区分5,000和10,000模板拷贝数,其置信度高达99.7%。
试剂和消耗品
ABI Prism® 7000型序列检测系统有一整套的试剂和消耗品。
TaqMan®基因表达分析试剂盒
提供200多种基因表达和SNP检测分析试剂盒。
尺寸 ABI Prism® 7000型荧光定量PCR仪
宽度 39 cm(15.25in) 深度 51 cm(19.75in) 高度 53 cm(20.75in) 重量 34kg(75lbs)
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HTL品牌代理商

HTL品牌代理商–上海金畔
1. HTL品牌介绍
波兰High Tech Lab公司生产高质量实验及临床仪器、耗材产品。该公司由两部分组成:位于Warsaw的PZ HTL S.A.生产精密测量产品;位于Ozorkow的HTL-STREFA Sp.zo.o.生产实验室耗
材及外科刀具。HTL产品通过了ISO9001质量体系认证,其中HTL Strefa Sp.zo.o.生产的医学产品符合欧盟Directive 93/42/EEC标准、并携带有CE标志,为美国食品与药物管理局(FDA)注册产
品。
HTL有20多年的精密移液器设计、生产经验,是世界上20多个品牌的移液器OEM工厂,HTL自有品牌的移液器更是在自己独有的制造水平之上博采众长,成为世界具有世界顶级品质的产品。
DISCOVERY系列移液器更是集HTL公司20多年制造经验之精华的扛鼎之作。
2. HTL重点产品
HTL有20多年的精密移液器设计、生产经验,是世界上20多个品牌的移液器OEM工厂,HTL自有品牌的移液器更是在自己独有的制造水平之上博采众长,成为世界具有世界顶级品质的产品。
DISCOVERY系列移液器更是集HTL公司20多年制造经验之精华的扛鼎之作。
3. HTL官网
http://www.htl.com.pl/
4. 金畔生物代理HTL品牌联系方式
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60336 Biodyne尼龙转印C膜负点6,6

上海金畔生物科技有限公司提供60336 Biodyne尼龙转印C膜负点6,6
60336 Biodyne尼龙转印C膜负点6,6
孔径:0.45um
厂家:PALL 原装
规格:24cm*3m/卷
Biodyne C膜是一种带负电的具有分布有高密度羧基基团的多孔表面的膜。这种膜可以通过与这些基团偶联反应衍生来。它对于可逆点杂交和亲和纯化应用很理想。北京索莱宝科技有限公司现货供应,欢迎咨询采购。
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