BD品牌代理商

BD品牌代理商–上海金畔
1. BD品牌介绍
BD是世界上最大的生产和销售医疗设备、医疗系统和试剂的医疗技术公司之一。致力于提高全世界人类的健康水平。BD专注于改进药物治疗,提高传染性疾病诊断的质量和速度,推进新型药物和疫苗的研究与发现。BD公司具有强大的研发能力和世界上最棘手的多种疾病进行斗争。公司于1897年在纽约成立,总部位于美国新泽西州的富兰克林湖,业务遍及全球。公司的业务可分为BD医疗、BD诊断、BD生物科学三大类,生产销售包括医用耗材、实验室仪器、抗体、试剂、诊断等产品。公司的服务对象包括医疗机构,生命科学研究所,临床实验室,工业单位和普通大众。
2. BD重点产品
公司的业务可分为BD医疗、BD诊断、BD生物科学三大类,生产销售包括医用耗材、实验室仪器、抗体、试剂、诊断等产品。
3. BD官网
www.bd.com
4. 金畔生物代理BD品牌联系方式
上海金畔生物科技有限公司
地 址: 上海市浦东新区东靖路699弄36栋701室
邮 编: 201208
qq:  2743691513
固话总机:021-50837765
订货热线:15221999938
网 址: www.jinpanbio.com
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Whatman无机膜AAO模板6809-5002 47mm*0.02um

Whatman无机膜AAO模板6809-5002 47mm*0.02um
Whatman Anopore 无机膜是各种实验室过滤的理想用品。这种新颖的材质制成的膜具有精
确、不变形的蜂窝形孔结构,并且每个孔之间没有横向交叉,这种特性确保了小于孔径的
颗粒滤过,而大于孔径的颗粒被阻截。Anopore 无机膜由高纯度的氧化铝基质通过电化学
制成,蛋白吸附力低、自身荧光非常小、无毒、支持细胞生长。
精确的孔结构和均匀的孔分布,无机膜能确保高效滤除颗粒。微生物和颗粒物保留在膜表
面,便于进一步用电子显微镜分析。经湿润后,膜变成半透明,因而不需对截留物进行转
移就可用光学显微镜观察。
无机膜是亲水性的,能与大多数溶剂和水溶液相容。因生产过程中不另加单体、高分子物
质、表面活性剂或润湿剂避免了样品污染。低蛋白吸附力,可减少样品的损失。
无机膜以Anodisc形式供应,也就是在无机膜边缘加上一个聚丙烯环(除13mm规格圆片)
,便于操作,适用于真空和压力过滤。
Anopore有三种孔径:0.02μm、0.1μm和0.2μm;和三种直径:13mm、25mm和47mm。
特性和功能
•高孔密度和均匀孔径分布使之成为一种特别精确的膜
•广泛的溶剂相容性,因而不必在实验室储备各种膜
•膜生产时不加添加剂,确保了极低的渗出物,不会污染样品
•极低的蛋白吸附,实现样品的损失的最小化
•浸湿时呈透明状,是显微镜分析的理想产品
应用
•HPLC流动相过滤和脱气
•超纯溶剂的制备
•比重分析
•脂类积压
•电子显微镜扫描研究
•通过落射荧光显微镜分析细菌
•微米和纳米过滤
•纳米金属杆制备
技术参数-Anopore无机膜
Anodisc 13 Anodisc 25 Anodisc 47
平均膜厚度 60µm 60µm 60µm
膜直径 13mm 21mm 43mm
膜类型 Anodisc氧化铝 氧化铝 氧化铝
支撑环材烊 无 聚丙烯 聚丙烯
构建方式 无 热合 热合
蛋白吸附 低 低 低
爆裂强度 65-110psi 65-110psi 65-110psi
最高工作温度 400℃ 40℃ 40℃
孔率 25-50% 25-50% 25-50%
高压蒸汽灭菌 是 否 否
折射率 1.6 1.6 1.6
订货信息-Anopore无机膜
尺寸(mm) 膜 孔径(µm) 目录号 亲水 蛋白
吸附力 化学
相容性 数量/包
13 Anodisc 13* 0.02 6809-7003 是 低 很低 100
13 Anodisc 13* 0.1 6809-7013 是 低 很低 100
13 Anodisc 13* 0.2 6809-7023 是 低 很低 100
25 Anodisc 25 0.02 6809-6002 是 低 很低 50
25 Anodisc 25 0.1 6809-6012 是 低 很低 50
25 Anodisc 25 0.2 6809-6022 是 低 很低 50
47 Anodisc 47 0.02 6809-5002 是 低 很低 50
47 Anodisc 47 0.1 6809-5012 是 低 很低 50
47 Anodisc 47 0.2 6089-5022 是 低 很低 50

美国AXYGEN 2.0ml螺口可立冻存管(带盖)

上海金畔生物科技有限公司提供2.0ml螺口可立冻存管(带 盖)
产品名称
2.0ml螺口可立冻存管(带 盖)
生产厂商
Axygen公司
其它参数

原产号 产品名称 包装 单位 价格
SCT-200-SS-C 2.0ml螺口可立无色冻存管 500支/包;8包/箱 604.00
SCT-200-SS-C-S 2.0ml螺口可立无色灭菌冻存管 500支/包;8包/箱 732.00
SCT-200-SS-A 2.0ml螺口可立杂色冻存管 500支/包;8包/箱 692.00
SCT-200-SS-A-S 2.0ml螺口可立杂色灭菌冻存管 500支/包;8包/箱 777.00
SCT-200-SS-B/other 2.0ml螺口可立纯色冻存管(多色) 500支/包;8包/箱 670.00

 

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上海金畔生物科技有限公司提供 T细胞分离用尼龙毛柱

上海金畔生物科技有限公司提供 T细胞分离用尼龙毛柱

在研究体内及体外的免疫系统时,分离淋巴细胞群是一个关键步骤。因为现在市场上并没有针对B细胞的特异性抗血清,所以分离淋巴细胞中的T细胞并不是十分方便。T细胞尼龙毛分离法利用了尼龙毛对B细胞的亲和力,从而使T细胞在没有严重损伤的情况下达到的足够的纯度。因为这个方法不像流式和磁珠费用昂贵,而且操作简便,所需要的条件也不高,是一种非常实用的方法。
首先要指出的是实验中所使用的是分离T细胞专用的尼龙毛(Nylon Fiber),不是化工上的尼龙纤维,曾经有人问过我这种问题,如果你买错了,可是做不出来的!
现在市面上有尼龙毛填料,也已经有了商品化的尼龙毛柱子,这两者的区别主要是以下两点:1.商品化的柱子的填料量是已经定好的,有一个确定的上样量范围。而自己买填料装柱可以控制填料量,也就是可以控制上样量,这对于样本量非常少,或是样本量非常大的实验需求非常合适。2.商品化的柱子已经经过了无菌处理(一般是辐射灭菌),而自己装柱当然就要自己灭菌了。
操作方法:
1.秤取1.5g尼龙毛装入20-30ml玻璃容器或注射器内(要可以灭菌的),填料的体积控制在15毫升左右(注射器上有标记,所以还是比较好控制的),因为尼龙毛的松紧关系到T细胞的回收率,所以要特别注意。注射器下端配接5厘米左右长的带有弹簧夹的橡皮管。
2. 加入大量的PBS平衡柱子后,用铝箔包裹,并置于适当的容器内,高压灭菌15分钟。
(商品化尼龙毛柱以上步骤可以省略,经过PBS平衡后可以直接进行下列步骤。)
3. 灭菌的尼龙毛柱垂直固定后放于超净台内,顶部以铝箔覆盖,避免污染。
4. 注射器下端,橡皮管,弹簧夹用无水酒精消毒。打开弹簧夹调节流速在大约3-4ml/min。
5.首先,加入3-4倍柱体的无血培养基平衡,之后加入相同体积的含有血清的培养基平衡(上述培养基都要预热),最后等培养基液面接近柱填料液面时,关闭弹簧夹。
6. 样本细胞悬浮液浓度控制在约5×108cells/ml,上样量一般是1/3-1/5柱体积。样品加入之后,再加入少量培养液,然后关闭弹簧夹。
7.覆盖铝箔,垂直固定,置于消毒过的容器中,于培养箱内37℃孵育1小时。此过程中柱子必须要保持垂直状态。
8. 从培养箱中拿出柱子,置于超净台内,除去铝箔。接上按照4.中的方法消毒的弹簧夹和橡皮管,加入适当体积经37℃预热的培养基,打开弹簧夹控制流速在3-4 mL/min,流出约5ml之后,流出的培养液基变得不透明,此时其中含有T细胞,收集这一部分培养基。
9. 基本上何时结束收集取决于流出液体中细胞的浓度,实际上,收集的量达到一个柱体积时就可以停止收集,因为即使收集更多的量,回收率几乎不会增加。
10 .上述操作后,实验结果如下:
细胞的回收率为: 15~20 %
T细胞含量: 85~95 %
B细胞污染率: 1 5 %
多数细胞被确定为T细胞。
(注)收集粘附于尼龙毛上的细胞时,将T细胞收集完毕后的尼龙毛再无菌操作的状态下取出,转移到适当的容器中,用镊子小心的将尼龙毛松开,粘附的细胞可以洗到培养基中。或者将注射器芯插入注射器内,通过压力使的粘附的细胞随着液体流出。
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美国Labnet离心机系列介绍

美国Labnet离心机系列介绍

1.PCR板迷你离心机    订货号:C1000-230V

 
 
主要用于96孔板PCR实验前后使用,离下挂壁液滴,改善实验效

Labnet 微孔板迷你离心机为全球首款专门为96孔板设计的瞬时离心机,方便离下挂壁液滴,专门解决PCR板内加样/液后挂壁、混合不均匀等问题。。
当前市面上大多数微孔板离心机都体积庞大,占据了大量的实验室空间。该款微孔板离心机设计独特、精小,仅6×6英寸。微孔板由离心机顶部插槽垂直装入离心机转子内,液体在表面张力的作用下保持在微孔板底部,因此不必担心漏液。
按下离心机前部的按钮,转子会瞬时加速到2500转/分,松开按钮,启动制动阀,转子停止。
●可以置于冷库中工作
●快速离下挂壁液滴
●PCR实验前后使用,显著改善实验  结果
●适用带裙边、不带裙边及各种标准PCR微孔板
●体积不到大多数微孔板离心机体积的1/4。

2.Spectrafuge 24D 微型高速离心机

 

该款离心机设计独特,外观小巧。有全新的空气循环系统防止转头过热,数显微处理器控制,有几种颜色供选择。两个小巧的按钮可以实现参数设置,LED显示设置的参数。速度可通过rpm或离心力来表示,运转设置成可定时、连续或瞬时。
转子设计合理,有24个孔位。StripSpin适配器为可选配件,可以安装在转子上离心0.2mL管或八联管。强力的无刷马达驱动转头可以迅速加速到设定转速。
空气通过机箱后面的通风口进入离心机且循环流动,即使在最高转速连续运转,转头中的样品温度也能够保持接近室温,不至于过热。

3.Prism高速台式离心机

 

Prism速台式离心机是Labnet最新产品之一。采用无碳刷强力电机和直观的操作控制面板,同时采用风冷设计,即使在最高速下工作,样品与空气摩擦产生的热量也能很好散出去,温度上升幅度很小,对样品起到很好的保护。
速度显示有rpm和rcf两种方式。离心模式有定时离心、连续离心和瞬时离心。内部采用独立的系统来保证离心机无振动运行,如果存在明显的不平衡,离心机将会自动迅速减速并停止。
使用设计独特的24×1.5/2.0mL转子,可以很方便地从转子内的离心管顶部取样/加样。可选不同规格的适配器。

4.Spectrafuge Mini 迷你离心机

 

该款手掌大小的离心机设计紧凑,非常适用于微管过滤和快速离心,防止离心管中液体挂壁现象。标配含有转子和适配器。适用于1.5mL、0.5mL和0.4mL的离心管及0.2mL八联管、单个PCR管,盖子半透明,易于打开。侧面按钮控制启动/停止。

5.Spectrafuge 6C离心机

 

本款离心机主要是为血液分离而设计的,适用于10mL和15mL离心管及有适配器的其他离心管,内腔清洁方便,最长可定时30分钟启动后上盖会自动锁上。可在冷库中使用。
高速适合含血小板浓度低的血浆的分离,低速适合含血小板浓度高的血浆的分离。同时该款离心机也适用于化学分析样品、尿沉淀、染色体组DNA粒化及其他各种需求。

6.Prism R 微型高速冷冻离心机

 

PRISM R微型高速冷冻离心机是Labnet离心机的最新产品,并迅速成为冷冻离心机的标准。拥有小巧的外观,具有强力的无刷电机和制冷能力。新款LCD操作面板,非常直观方便的设定各种参数.
速度可以用转/分(rpm)表示,最高可达13500rpm,最小步长100rpm;也可以用离心力rcf表示,最高可达17135g,最小步长100g。离心方式有定时离心、连续离心及瞬时离心,离心时间可以预设为0.5-99分钟。强力的制冷系统可以把温度维持在低达-10℃,在8分钟内从室温到达4℃。
强力的无碳刷电机驱动能快速把转子加速到设定的速度。PRISM R装备了独立的微电脑不平衡检测系统以保证在离心过程中不会振荡,运行中如果出现显著的不平衡,它将会自动停止运行,从减速到停止的时间少于18秒,以避免破坏样品。
独特的24孔转子,方便从离心管顶部取样。坚固的铝转子内有独立的离心管槽,如果管子破裂、样品将会全部留在槽内,避免污染其他样品。转子适合1.5/2.0ml的离心管、使用更小的离心管需要选配适配器,另有0.2mLPCR管、8排管适配器可选。转子位于锥形座架上,方便移动和清洁转子。
●最新“速冷”功能在8分钟内把温度降到4℃.
●强力无碳刷电机驱动,离心力高达17153g。
●方便灵活取样设计的坚固铝转子(24*1.5/2.0ml)。
●友好的大屏幕LCD控制面板。
●不平衡检测系统、自动停止功能。
●运行安静、最高转速下低于56分贝。
●强力制冷系统,温度范围 -10℃—40℃。
●最高速度下维持4℃。
●rpm或者rcf两种方式显示速度。
●加速到最大速度小于16秒、降回零速小于18秒。
●两年免费保修。

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whatman打孔取样器 whatman打孔器

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whatman打孔取样器 whatman打孔器更多
Harris Micro-Punch铝质打孔取样器/取样垫
Harris Micro取样器(1.2mm,2.0mm或3.0mm)和取样垫
荐用于在FTA卡上取样。可列换取样头,不锈钢经处耐用,可以消毒。取样垫确保样品清洁的被操作
1.2mm取样器推荐用于采用FTA卡采集的全血和其它DNA含量较高的样品
2.0mm取样器推荐用于采用FTA卡采集的口腔细胞,质料和其它 DNA含量较低的样品
3.0mm取样器推荐用于FTA Elute卡
Harris打孔器是组织或者截取微细部位样品的得力帮手!
应用:
l 、法医学应用-打孔取材,从现场保存带回,对于一些源材料,诸如纸张、胶片、布料、树叶、漆片、薄膜等可以直接取出最优芯样
2、电生理学的应用-在快速分裂前的离散区域取样进行批记录
3、药理学的应用-可以在大脑不同区域取样以便检测其神经传导和代谢产物变化(对药物试剂的反应)
4、解剖学的应用以及电子显微镜方面的应用也很广泛
一、Harris Uni-Cores打孔器
多用途,适合较软目标取样的的工具。由塑料PP制造,器体中空,内置一带由锋利周缘的不锈钢打孔头,还有样品从打孔头内打出的弹射装置。此产品单独无菌包装,可以一次性使用,也可以用乙醇浸泡打孔头,在121℃温度下煮30分钟,加压1个大气压再接着使用。
二、Harris Micro-Punch打孔器
l 打孔头和栓塞均由高度440c不锈钢制造,打孔头经过热处理,Rockwell硬度Rc-58,打孔头周缘经过打磨锋利无比,经得起长期使用。打孔头可以更换,规格有:0.5mm,1.0mm,1.2mm,2.0mm,3.0mm,栓塞也可以更换。筒身由润滑型塑料制造。打孔器总长度140mm,灭菌温度可耐180。
三、Harris e-Core电动打孔器
Harris e-Core 是一款紧凑、多用途、电动的打孔器,可用于不同DNA保存样本。Harris e-Core可以填补廉价手动打孔器与自动化打孔器之间的空白地带。“玩具式”把手,简单的操作,可以让Harris e-CoreTM更舒适、高效,可以满足高通量打孔需要。打孔、收回、存储动作一气呵成,时间极短。弹出系统可以控制所打孔片的排出速度和传输过程。
Harris e-Core 不产生静电,且其刀头与Micro-Punch刀头通用,更换方便,降低了成本。Harris e-Core 有三种打孔尺寸规格,孔径直径分别为1.2/2.0/3.0mm。每一种规格都有固定的孔栓棒。其打孔刀头是Harris Micro-Punch的刀头。打孔器的机体材料是高密度塑料。电源参数:100-240伏、0.7A、50/60Hz,四款插头,可以满足多个国家的电源要求。同时提供一个6×8英寸的打孔垫。
1:Harris e-Core机身;
2:额外的2个打孔刀头;
3:束带;
4:多型号转换插头,欧洲式、英国式、澳洲式、北美式;
5:电源插头;
6:6×8英寸打孔垫;
7:包装盒;
8:用户使用说明。
GE Whatman订货信息-FTA试剂和附件
Harris Micro打孔取样器
WB100064Harris Micro取样器(0.5mm)及取样垫Aluminum Micro-Punch with Mat, 0.5mm
WB100065Harris Micro取样器(1.0mm)及取样垫Aluminum Micro-Punch with Mat, 1mm
WB100005Harris Micro取样器(1.2mm)及取样垫Aluminum Micro-Punch with Mat, 1.2mm
WB100007Harris Micro取样器(2.0mm)及取样垫Aluminum Micro-Punch with Mat, 2mm
WB100038Harris Micro取样器(3.0mm)及取样垫Micro-Punch with Mat 3.0MM 1/PK
WB100025Harris Micro取样器(1.2mm)及活塞Micro-Punch PLUNGER 1.2MM 1/PK
WB100026Harris Micro取样器(2.0mm)及活塞Micro-Punch PLUNGER 2.0MM 1/PK
WB100041Harris Micro取样器(3.0mm)及活塞Micro-Punch PLUNGER 3.0MM 1/PK
WB100006备用取样头(1.2mm)Micro-Punch TIP 1.2MM 1/PK
WB100008备用取样头(2.0mm)Micro-Punch TIP 2.0MM 1/PK
WB100042备用取样头(3.0mm)Micro-Punch TIP 3.0MM 1/PK
WB100020备用取样垫CUTTING MAT 1/PK
WB100052HARRIS E-CORE电动打孔器1.2mmHARRIS E-CORE 1.2MM
WB100048HARRIS E-CORE电动打孔器2.0mmHARRIS E-CORE 2.0MM
WB100049HARRIS E-CORE电动打孔器3.0mmHARRIS E-CORE 3.0MM
Harris Uni-Core打孔取样器
WB100028Harris Uni-Core取样器(1.2mm)UNICORE PUNCH 1.2MM 4/PK
WB100029Harris Uni-Core取样器(2.0mm)UNICORE PUNCH 2.0MM 4/PK
WB100039Harris Uni-Core取样器(3.0mm)UNICORE PUNCH 3.0MM 4/PK
WB100040Harris Uni-Core取样器(4.0mm)UNICORE PUNCH 6.0MM 4/PK
FTA纯化试剂
WB120204FTA纯化剂FTA REAGENT 500ML 1/PK
拭子
WB100035无菌OMNI采样棒/拭子OMNISWAB 100/PK
WB100032无菌泡沫头采样棒/拭子FOAM APPLICATOR 100/PK
多层保护袋
WB100036POUCH 3.75X3 IN 100/PK
WB100037POUCH 4.37X6.5 IN 100/PK
配件
WB100030FTA基因卡托盘FTA GENECARD TRAY 20/PK
WB100014FTA微型卡BLOODSTAIN CARD 100/PK
WB100003干燥剂DESICCANT 1000/PK

多酚氧化酶(PPO)的分离提取 DEAE-纤维素DE 52

实验一 多酚氧化酶(PPO)的分离提取 DEAE-纤维素DE 52

一、原理与目的
多酚氧化酶是植物组织内广泛存在的一种含铜氧化酶,植物受到机械损伤和病菌侵染后,PPO催化酚与O2氧化形成醌,是组织形成褐变,以便损伤恢复,防止或减少感染,提高抗病能力。醌类物质对微生物有毒害作用,所以伤口醌类物质出现是植物防止伤口感染的愈伤反应,因而受伤组织一般这种酶的活性就会提高。多酚氧化酶也可与细胞内其他底物氧化相偶联,起到末端氧化酶的作用。
PPO的存在是水果、蔬菜褐变及营养丧失的主要原因之一。PPO氧化内源的酚类物质生成邻醌,邻醌再相互聚合成醌或蛋白质、氨基酸等作用生成高分子络合物而导致褐色素的生成,色素分子量愈高,颜色愈暗。多酚氧化酶活性高低也是马铃薯解除休眠的指标之一。
本实验将采用马铃薯为主要材料,通过组织细胞破碎匀浆、过滤、离心、硫酸铵沉淀、透析等步骤获得PPO的粗酶液。
通过本项实验,学习和了解蛋白质的提取、分离的基本原理和方法,掌握相关仪器设备的操作使用,以及蛋白质的提取、分离的系统技术。
二、材料与试剂
(1)马铃薯(大约每小组100-200g)
(2)试剂:
0.03M磷酸缓冲液PH6.0(内含0.02M巯基乙醇,0.001MEDTA,5%甘油,1%的聚乙烯吡咯烷酮)配制时配×10倍的浓缩液1000ml;固体硫酸铵;0.03M磷酸缓冲液PH6.0(内含0.02M巯基乙醇,0.001MEDTA,0.005MgCL2)配置时配
(3)实验器械与仪器设备:
试管与试管架;烧杯、玻璃搅棒;移液管、滴管等;试剂瓶;透析袋;
过滤纱布;植物组织匀浆器;pH计和pH试纸;GL-20C高速冷冻离心机;
DL-7A大容量低速冷冻离心机
三、操作步骤
1:粗酶提取:
水果肉组织按1:1(W/V)比例与003M磷酸缓冲液PH6.0(内含0.02M巯基乙醇,0.001MEDTA,5%甘油,1%聚乙烯吡咯烷酮)混合,匀浆4层后纱布过滤,滤液以6000rpm离心10min,弃除沉淀获得酶提取液。
2:盐析分级沉淀:
在酶提取液中加入固体硫酸铵使其达到40%饱和度(边加边搅拌达到充分溶解),然后6000rpm离心20min弃除沉淀;离心上清液在加入固体硫酸铵达到70%饱和度(边加边搅拌达到充分溶解),再以6000rpm离心20min,弃除上清夜,收集粗酶沉淀。
四、实验结果
获得PPO粗酶液。
实验二 PPO粗酶液的纯化
一、原理
1.葡聚糖凝胶Sephadex G-200凝胶柱层析 利用大分子不能进入凝胶颗粒内部 最先流出柱外,而小分子物质进入凝胶颗粒内部,流速慢而最后流出柱外,凝胶层析法能将不同分子大小的物质分离开。(G-200能分离800-80000D分子量的蛋白质)
2.利用离子交换法,选取DEAE-阴离子纤维素DE52柱材料,因为PPO是带有阳离子的蛋白质,在层析时会吸附在柱材料上,而杂蛋白会洗下。后用NaCl梯度洗脱PPO,(NaCl为强离子交换剂,能将弱吸附在柱材料上的PPO置换下来)。粗酶液从而得到纯化。
二、材料与试剂
试剂:0.02M Tris-HCL缓冲液Ph7.4(内含0.001M EDTA)配制时配×10倍浓缩液1000ml;NaCL;聚已二醇;DEAE-纤维素DE52;葡聚糖凝胶Sephadex G-200;兰葡萄糖-40、70、100等;
实验器械与仪器设备:试管与试管架、烧杯、玻璃搅棒、移液管、滴管等;试剂瓶、层析柱、pH计和pH试纸、恒流泵、梯度混合仪、核酸蛋白监测仪、GL-20C高速冷冻离心机、DL-7A大容量低速冷冻离心机
三、操作步骤
1.葡聚糖凝胶的处理、装柱及平衡
(1)柱材处理
称取一定量的Sephadex G-200干粉,加无离子水或蒸馏水浸泡溶胀48h,去掉悬浮的细微颗粒,为防止凝胶颗粒中的空气存在,影响层析效果,凝胶装柱前一定要将凝胶液中的气体除掉,其办法是将凝胶液放进抽滤瓶中,进行抽真空处理,直到凝胶液中没有气泡出现为止。
(2)装柱
将层析柱清洗干净垂直固定到层析架上,加1/3体积的无离子水,打开下出液口,水流畅通,即刻将小烧杯中装有适宜浓度的凝胶液(凝胶的浓度过高会产生气泡,影响蛋白质分离速度,浓度过低易产生凝胶分层,影响蛋白质的分离效果)轻轻倒入层析柱中,凝胶自然慢慢沉降在层析柱底部,凝胶沉积直到离层析柱上端1.5-2cm处,停止装柱,剪一与柱内径相等的滤纸片覆盖于凝胶上。层析柱上端进液口连接恒流泵,下出液口连接蛋白质监测仪,待层析柱的平衡。
(3)平衡
在柱层析上样前必须对层析柱进行平衡,所谓平衡就是将层析柱中的溶液用层析过程的缓冲液(洗脱液)置换出来,使层析柱中的缓冲系统与柱层析过程中的系统一致。其方法是:利用层析柱上端的恒流泵将平衡缓冲液泵入到层析柱内,打开层析柱下端的出口,平衡液流速在0.5-1ml/min,当下出口流出液的PH值与平衡缓冲液的PH值一致时,层析柱达到了平衡。在本实验中,用0.002M Tris-HCL缓冲液PH7.4(内含0.0001M EDTA),平衡Sephadex G-200凝胶。
2.上样:将粗酶液上柱。
3.洗脱:用0.02M Tris-HCL缓冲液Ph7.4(内含0.001M EDTA)洗脱,收集洗脱液进行酶活性、蛋白质浓度、聚丙烯酰胺凝胶电泳分子量的基本性质分析测定。
4.DEAE-纤维素的处理及装柱
(1)处理
本实验采用的是DEAE-纤维素DE 52 是弱酸型阴离子交换剂,具体处理方法为:先将DE52阴离子交换剂干粉浸泡于蒸馏水中,去除杂质;再在0.5N的HCL溶液中浸泡1-2h,再用无离子水或蒸馏水洗至pH值中性或PH4以上,并将其在抽滤漏斗中抽干;将抽干的离子交换剂浸泡在0.5N的NaOH溶液中1-2h,再用无离子水或蒸馏水将其洗至中性。
(2)装柱
将层析柱清洗干净垂直固定到层析架上,加1/3体积的无离子水,打开下出液口,水流畅通,即刻将小烧杯中装有适宜浓度的柱材,轻轻倒入层析柱中,凝胶自然慢慢沉降再层析柱底部,凝胶沉积直到离层析柱上端1.5-2cm处,停止装柱。层析柱上端进液口连接恒流泵,下出口连接蛋白质监测仪,待层析柱的平衡。
(3)平衡
在柱层析上样前必须对层析柱进行平衡,所谓平衡就是将层析柱中的溶液用层析过程的缓冲液(洗脱液)置换出来,使层析柱中的缓冲系统与柱层析过程中的系统一致。其方法是:利用层析柱上端的恒流泵将平衡缓冲液泵入到层析柱内,打开层析柱下端的出口,平衡液流速在0.5-1ml/min,当下出口流出液的PH值与平衡缓冲液的PH值一致时,层析柱达到了平衡。在本实验中,用0.002M Tris-HCL缓冲液PH7.4(内含0.0001M EDTA),预先将DE-52柱进行平衡。
5.上样:
将洗脱酶液上样,用0.02M Tris-HCL缓冲液pH7.4(内含0.001M EDTA)洗脱杂蛋白。
6.洗脱:
用含NaCL(0.2-0.6M)的0.02M Tris-HCL缓冲液pH7.4(内含0.001M EDTA)进行梯度洗脱。
7.测定酶活性和蛋白质浓度
实验三 PPO活性测定
一、原理与方法
PPO催化各种酚与O2氧化为醌。本实验是采用邻苯二酚为底物,在0.2M磷酸氢二钠-0.1M柠檬酸缓冲液PH5.8的反应体系中,PPO催化邻苯二酚形成褐色的醌,在分光光度计410nm处使反应体系的OD值产生变化,通过OD值上升的读数变化确定PPO的酶活大小。
其方法是:在含有4mlPH5.8的0.2M磷酸氢二钠-0.1M柠檬酸缓冲液试管中加入0.05ml0.05M邻苯二酚溶液,在30℃恒温水浴中预热后加入0.05ml酶液,反应5分钟,在分光光度计410nm处读取吸光值。在上述条件下,以A410读数,以每分钟增加0.01O.D.值定义为一个酶活性单位(U)。
二、仪器与试剂
(1)样品:
多酚氧化酶粗酶液
硫酸铵沉淀组分
DE-52洗脱组分
葡聚糖凝胶洗脱组分
(2)底物:
邻苯二酚:O.01M邻苯二酚溶液
(3)反应体系:
0.2M邻酸二氢钠-0.1M柠檬酸缓冲液PH5.8
(4)器皿与仪器:
试管、恒温水浴等
分光光度计
三、酶蛋白的比活性
比活性=酶活单位(U)/mg蛋白质
四、实验结果与分析
1. Sephadex G-200的洗脱组分的相对浓度(OD590)和相对酶活(OD410)
结果列表
试管号 蛋白质浓度 PPO酶活 试管号 蛋白质浓度 PPO酶活
空白 0 0 3 0.16 0.09
粗酶液 0.20 0.14 4 0.03 0.03
1 0.00 0.01 5 0.03 0.01
2 0.13 0.09 6 0.02 0.02
分析:2和3试管中含绝大部分所需蛋白,保存进行下一步纯化。
2. DE-52的洗脱组分的相对浓度(OD590)和相对酶活(OD410)
结果列表
试管号 蛋白质浓度 PPO酶活 试管号 蛋白质浓度 PPO酶活
空白 0 0 3 0.03 0.05
粗酶液 0.22 0.16 4 0.09 0.05
1 0.00 0.00 5 0.07 0.02
2 0.03 0.02 6 0.03 0.00
分析:酶活性高低不一定与蛋白含量高低成正比,3和4试管中含较多所需蛋白。
实验四 胰酶分离提取
一、原理与目的
提取制备酶的经典方法,多采用硫酸铵分级沉淀,胰酶在75%饱和度硫酸铵中沉淀,其它杂蛋白一般在10%硫酸铵饱和度下被沉淀而除去。经此多次提取,最后在PH8.0硼酸缓冲液中得到结晶。
胰酶在PH3.0时最稳定,可在低温下储存较长的时间而不失活;低与此PH酶易变性;高于PH5时,酶易自溶而失活。因此提取制备胰酶的全部操作过程应在低温和低PH下进行。胰酶以无活性的酶原形式存在于动物的胰脏中。胰蛋白酶原在正常生理条件下可被肠激酶和钙离子所激活或自我环化成为有活性的酶。猪胰蛋白酶原分子量约24000-25000,而猪胰酶分子量为23400。在酶原活化的过程中,酶原N端Lys与Ile之间的 一个肽链被断裂,丢失一个6肽,分子构象发生改变,PI变成10.8。
本实验拟通过从猪胰脏中制备胰酶结晶实验,掌握酶的制备、一般分离、提取、纯化和结晶的操作技术。同时为亲和层析、免疫学实验准备实验样品。
二、材料与试剂
1.仪器
紫外光分光光度计、恒温水浴、离心机、组织捣碎机、PH计、显微镜、秒表、剪刀、镊子、搪瓷盆、乳钵、大玻璃漏斗、抽滤瓶,塑料小桶、纱布、PH试纸,滤纸、玻璃器皿等。
2.材料:新鲜猪胰脏
3.试剂及溶液配制
pH2.5乙酸酸化水、2.5M H2SO4溶液、2M.NaOH溶液、5M NaOH溶液、01M HCL溶液、0.025M HCL溶液、0.01M HCL溶液、0.4M pH9.0硼酸缓冲液(母液为0.8M,用时稀释一倍)、Tris、硫酸铵。
0.8M pH9.0硼酸缓冲液:取20ml0.8M四硼酸钠溶液,混合后用PH计校正。
三、操作步骤
1.胰蛋白酶原的提取与分离:
(1)称取1-1.5Kg新鲜猪胰脏,在冰浴下剥除脂肪和结缔组织,在低温下用绞肉机绞碎胰脏(或用高速组织匀浆机捣碎)加1-2倍体积以预冷却的PH2.5-3.0乙酸酸化水溶液提取(按1g组织相当于1ml体积计算,以此类推)。检查提取液中PH,若高于PH3.0时应及时用10%乙酸调节,使提取液维持PH2.5-3.0之间。在冷室5℃左右搅拌提取18-24h,而后用4层纱布过滤,尽量拧挤出滤液,滤液呈乳白色,用约300mlpH2.5乙酸酸化水再提取残渣一次(时间约为1-2h),合并滤液,此时滤液PH值较高,可用5M H2PO4溶液调整PH至2.5-3.0,放置 3-5h后,浑浊滤液冷却后,用玻璃漏斗进行自然过滤,滤液呈黄色透明液体,收集滤液,量其总体积,弃去沉淀物。
(2)盐析:滤液加固体粉状硫酸铵进行盐析,使溶液至75%饱和度。盐析溶液放冷室中过夜,次日用4000r/min离心机离心,或用布氏漏斗抽滤,滤饼经压干后称重,可得约20g胰蛋白酶原粗制品。
(3)胰蛋白酶原得激活:将胰蛋白酶原粗制品用10倍体积得冷蒸馏水,分多次加入使滤饼溶解,溶液呈乳白色,量其体积,取出1ml溶液用于测定,溶液中硫酸铵得含量(约为滤饼重得1/4)。因为硫酸铵可以与活化剂钙离子结合,生成硫酸钙,如果钙离子过少会直接影响胰酶原的激活过程,按浓度量计算,将已研细的固体CaCL2慢慢加入酶原溶液中,边加边搅拌均匀。用5MNaOH溶液调PH至8.0。在酶溶液加入约5mg结晶猪胰蛋白酶,轻轻搅拌均匀,置5℃冰箱中使酶原活化。
(4)纯化:去除杂蛋白,量取胰蛋白酶溶液体积后,用5M硫酸溶液调节滤液PH至2.5-3.0,抽滤除去硫酸钙沉淀,滤液体积约1000ml,加入已经研细的硫酸铵粉末,使其溶液达40%饱和度(每升滤液加242g硫酸铵)。放置5℃冰箱中5-8h,抽滤除去沉淀。
实验五 卵清蛋白分离提取
一、实验目的与原理
鸡卵粘蛋白存在于鸡蛋清中,对胰蛋白酶有强烈的抑制作用,高纯度的鸡卵粘蛋白抑制胰蛋白酶的分子酶的分子比为1:1。鸡卵粘蛋白在中性或酸性溶液中对热和高浓度的脲都是相当稳定的,而在碱性溶液中较不稳定。
由于鸡卵粘蛋白对胰蛋白酶有强烈的抑制作用,因此可以用鸡卵粘蛋白做亲和配基配制纯化胰酶的亲和材料。
二、材料与试剂:
1.材料:新鲜鸡蛋2只
2:仪器:抽滤瓶500-1000ml、烧结漏斗、移液器、磁力搅拌器
3:试剂:
10%TCA,用固体NaOH调调PH至1.05-1.10,需要50ml、5N HCL、5N NaOH、冷丙酮、胰蛋白酶液、BAEE-0.05M,PH8.0Tris-HCL缓冲液(每ml含0.34BAEE和2.22mgCaCL2),50ml
pH8.0,0.1M Tris-HCL缓冲液
三、操作步骤
1,取两只新鲜鸡蛋,得蛋清50ml,置于烧杯中,外用温水浴25℃-30℃,在不断搅拌条件下,缓慢加入等体积得三氯乙酸-丙酮(1:2V/V),立即出现大量白色絮状沉淀,加完后最终PH约3.5,再继续搅拌30min,然后在4℃冰箱中放置过夜。
2,次日用布氏漏斗抽滤,得黄绿色清液。
3,边搅拌边加入4℃预冷的丙酮200ml沉淀蛋白,在4℃放置2h之后将上清液小心倒入瓶中回收,下部沉淀部分于4000rpm离心5min,收集沉淀。
4,将沉淀溶于10ml无离子水中,对无离子水(50倍)透析4h,换水两次,再对碳酸钠缓冲液透析过夜,4000rpm离心10min ,去除不溶物。
实验六 亲和层析纯化胰酶
一、实验目的与原理
生物大分子化合物的重要特征之一是具有与某些相对应的分子通过次级键或共价键专一结合的能力即亲和力。例如酶与抑制剂之间,抗原与抗体之间,结合的双方不仅是专一的,而且结合以后可以在不丧失生物活性的基础上用物理或化学的方法进行解离。根据这一特性,如果把具有亲和力的一对分子的某一方连接于水不溶的固体载体上作为固定相,那么另一方随着流动相流经该固定相的时候,双方便亲和结合为一个整体。然后只有改变某种物理条件或化学条件使结合的双方解离,即能得到于固定相有特异亲和力的某一特定物质。这种利用生物分子和相对应分子之间亲和结合和解离性质而建立起来的层析方法称之为亲和层析。
本实验通过将胰蛋白酶抑制剂(protease inhibitor)(protease inhibitor)(protease inhibitor)-鸡卵粘蛋白与Sephadex-G75偶联及亲和层析纯化胰酶的操作,以了解亲和层析的基本原理,掌握亲和柱材活化偶联及亲和层析操作的基本过程和技术。
二、仪器与试剂
1.鸡卵粘蛋白制备
2.Sephadex-G75的活化和偶联
2.5g干重的葡聚糖凝胶Sephadex-G75 、0.05M NaCL溶液 50ml、纯化的鸡卵粘蛋白87.5mg、 5% K2CO3、0.27gKBH4 (溶于20ml水)
3.亲和层析
0.1M Tris-HCL pH7.5(含0.5M KCL,0.05M CaCL2) 200ml、粗胰蛋白酶约50ml 、0.1N甲酸钾、0.5M KCL pH2.5 100ml
仪器器材:抽滤瓶500-1000ml、层析柱、紫外分光光度计、紫外蛋白检测仪、烧杯漏斗、移液管、磁力搅拌器
三、操作步骤
1、鸡卵粘蛋白的制备
2、Sephadex-G75的活化及偶联
2.5g干重的葡聚糖凝胶Sephadex-G75溶胀洗涤数次,缓慢搅拌,加入0.05M NaCL溶液50ml ,30min,蒸馏水洗涤数次,抽干备用,活化凝胶,纯化的鸡卵粘蛋白87.5mg 溶于35ml水,加入活化葡聚糖凝胶,75%K2CO3,调pH7.5-9.0,缓慢搅拌3h。反应过程随时加入5%K2CO3,以维持pH的稳定。0.27gKBH4 溶于20ml水,缓慢搅拌加入上述体系反应5h,pH维持在6.5-7.5,洗涤。
3、胰蛋白酶的亲和层析
卵类粘蛋白在pH7-8的条件下能与胰蛋白酶专一地结合,而在pH2-3时又能解离,因而掌握好上柱地PH条件和洗脱缓冲条件,便可将胰蛋白酶从含杂蛋白地粗酶液中选择性地结合于柱上,待洗去不结合或非专一性结合地杂蛋白后,改变PH值便可将胰蛋白酶洗脱下来。从而达到纯化地目的。由于亲和层析结合地专一性,上柱体积可以比较大,得到浓缩的提纯产品。
(1)亲和层析
将鸡卵粘蛋白-Sephadex-G75装柱(1×10cm),用pH7.5,0.1M含 0.5M KCL,0.05M CaCL2的缓冲液平衡,平衡约2-3倍的柱体积。将粗胰酶液上柱层析。用紫外蛋白监测仪280nm处检测蛋白质吸收峰,随着上柱和流出的杂蛋白量的平衡,吸收峰达到稳定,一旦上柱的胰蛋白酶量超过柱的负荷时,则胰蛋白酶溢出,使吸收峰升高,此时应停止样品上样,改用pH7.5的平衡缓冲液冲洗出杂蛋白,待洗出液的吸收回到基线后,改用0.1N的甲酸钾0.5M KCL,Ph2.5的洗脱液解析,柱的流速维持在1.5ml/min左右,收集洗脱下来的蛋白峰蛋白,测总蛋白量及比活性,并根据上柱样品的总蛋白量和比活性计算经亲和层析后胰蛋白酶比活性提高的倍数,总蛋白回收率,胰蛋白酶量。
当胰蛋白酶峰洗出,待紫外吸收回到基线后,重新用缓冲液平衡,亲和层析柱可以反复使用。
(2)胰酶蛋白和活性测定

 

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2.相对定量 相对定量分析通过一个标准样本来计算表达水平,而不是使用标准曲线。使用内源性的对照来校正样品的加样量。
3.高分辨的SNP检测 7000型荧光定量PCR仪还能利用多色荧光检测单核苷酸多态性(SNPs)。
3.阴/阳性分析(终点分析) 使用内部阳性对照(IPC),7000型荧光定量PCR仪可进行阴/阳性分析。由于每个待检测样品中都加入阳性对照品,可以有效防止假阴性的结果。
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1.7000型序列检测仪
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    内容介绍

    Discovery系列移液器特点:
    1、 单道移液器和多道移液器均可以整支高温消毒。(121℃0.1MPa条件下消毒20分种)。10次灭菌内无需校准。
    2、 人体工程学的精湛设计,自然地握持手柄和操作,无需大力。无论是设定容量,移液或是排卸吸嘴,整个过程动作顺畅,适合每天进行的日常工作。
    3、 单道移液器和多道移液器容量调整由原来的一点调整改为二点调整,避免在调整容量过程中夹掩手套。揿钮有左右各3mm的自由行程,吸、排液时不会改变已设定吸取量。
    4、 多道移液器吸嘴套筒可以伸缩,这样可使各个通道受力均匀,安装吸嘴时不用左右摇晃,即可保证各个吸嘴均匀的安装在移液器上。
    5、 1000uL以上量程移液器活塞采用特殊陶瓷材料制成,可抗腐蚀,耐酸碱,延长移液器活塞使用寿命。
    6、 弹射器设计长短可调(见右图),不仅使移液器兼容不同品牌的吸嘴,也使排卸吸嘴时格外轻松。大容量移液器(DV5000及DV10000)也同样装有弹射器。—每支移液器均随包装附有3只内部长短不一的H型弹射器适配头,通过更换适配头来改变弹射器的整体长度。
    7、 每支移液器均配有支架及校准工具,用户可以在实验室自行校准移液器。
    8、 更加符合GLP规范,吸液按扭及弹射器按钮都有明显色标,与型号及备用的吸嘴相符。
    9、 HTL移液器任何一个细小的零部件均由波兰HTL公司原厂生产。
    10、各种型号的移液器均通过ISO9001质量认证,并提供 3年质量保证。
    移液器的精确度和精密度除了与移液器自身品质相关外,还和使用的吸头的品质有关。下表是Discovery移液器的吸头配套参数
     

    型号
    目录号
    测试量(ul)
    精确度 (%)
    精密度 (%)
    适用吸头
    DV2
    0.1-2ul
    4301
    0.2
    ±12.0
    ±6.0
    10ul
    1.0
    ±2.7
    ±1.3
    Max
    2.0
    ±1.5
    ±0.7
    DV10
    0.5-10ul
    4302
    Min
    0.5
    ±4.0
    ±4.0
    5.0
    ±1.0
    ±0.8
    Max
    10.0
    ±0.5
    ±0.4
    DV20
    2-20ul
    4303
    Min
    2
    ±3.0
    ±1.5
    200ul
    10
    ±1.0
    ±0.7
    Max
    20
    ±0.8
    ±0.3
    DV50
    5-50ul
    4307
    Min
    5
    ±2.5
    ±2.0
    25
    ±1.0
    ±0.6
    Max
    50
    ±0.8
    ±0.4
    DV100
    10-100ul
    4304
    Min
    10
    ±1.6
    ±0.8
    50
    ±1.0
    ±0.4
    Max
    100
    ±0.8
    ±0.3
    DV200
    20-200ul
    4305
    Min
    20
    ±1.2
    ±0.6
    100
    ±1.0
    ±0.3
    Max
    200
    ±0.6
    ±0.2
    DV250
    50-250ul
    4300
    Min
    50
    ±1
    ±0.4
    300ul
    125
    ±0.8
    ±0.3
    Max
    250
    ±0.6
    ±0.3
    DV1000
    200-1000ul
    4306
    200
    ±0.8
    ±0.4
    1000ul
    500
    ±0.7
    ±0.25
    Max
    1000
    ±0.6
    ±0.15
    DV5000
    1000-5000ul
    4308
    Min
    1000
    ±0.6
    ±0.3
    5000ul
    2500
    ±0.6
    ±0.3
    Max
    5000
    ±0.5
    ±0.2
    DV10000
    1000-10000ul
    4309
    Min
    1000
    ±2.5
    ±0.6
    10000ul

     
    订货信息
     

    产品编号 产品内容 规格
    4301 单道可调精密移液器 0.1-2ul
    4302 单道连续可调精密移液器 0.5-10ul
    4303 单道连续可调精密移液器 2-20ul
    4307 单道连续可调精密移液器 5-50ul
    4304 单道连续可调精密移液器 10-100ul
    4305 单道连续可调精密移液器 20-200ul
    4300 单道连续可调精密移液器 50-250ul
    4306 单道连续可调精密移液器 100-1000ul
    4308 单道连续可调精密移液器 1-5ml
    4309 单道连续可调精密移液器 1-10ml
    5221 8道连续可调精密移液器 1-10ul
    5222 8道连续可调精密移液器 5-50ul
    5223 8道连续可调精密移液器 20-200ul
    5224 8道连续可调精密移液器 50-300ul
    5225 12道连续可调精密移液器 1-10ul
    5226 12道连续可调精密移液器 5-, 50ul
    5227 12道连续可调精密移液器 20-200ul
    5228 12道连续可调精密移液器 50-300ul
    20 连续加样器MiniLab201 0.05-50ml
    302 移液管电动助力器SwiftPet 0.1-100ml