D-荧光素 活体成像之荧光素

D-荧光素
原理
D-荧光素(D-Luciferin)是荧光素酶(Luciferase)的常用底物,普遍应用于整个生物技术领域,尤其是体内活体成像技术。其作用机制是在ATP和荧光素酶的作用下,荧光素(底物)能够被氧化发光。当荧光素过量时,产生的光量子数与荧光素酶的浓度呈正相关性(见下图)。
说明: C:\Users\qcbio\Desktop\生化发光反应式.tif
将携带荧光素酶编码基因(Luc)的质粒转染入细胞后,导入研究动物如大、小鼠体内,之后注入荧光素,通过生物发光成像技术(BLI)来检测光强度变化,从而实时监测疾病发展状态或药物的治疗功效等。也可以利用ATP对此反应体系的影响,根据生物发光强度的变化来指示能量或生命体征。
分类

D-Luciferin, Sodium Salt D-Luciferin,Potassium Salt  D-Luciferin Firefly, Free Acid
分子式 NaC11H7N2O3S2 · H2O C11H7N2O3S2 K C11H8N2O3S2
分子量 320.32 g/mol 318.42 g/mol 280.33 g/mol
外观 淡黄色粉末 淡黄色粉末 类白色至浅黄色粉末
溶解性 易溶于水(100 mg/ml) 易溶于水(60 mg/ml) 本品难溶于水,除非加入稀碱促进其溶解。
纯度 99.7% 99.7% >99%

使用方法
1)体外实验:
a:储存液配置:将1 g的荧光素钠盐或钾盐溶解于33.3 ml水中,制备成30 mg/ml的储存液。混匀,0.2μm滤膜过滤(可吹入惰性气体,如氮气,以防止氧化。)-80℃避光保存,一年内有效。
b:使用:①在冰上避光解冻(若是在冰上比较难解冻,可短暂温浴,并轻柔混匀)。②用培养基以1:200的比例稀释储存液为150μg/ml。③去除培养细胞的培养基直至无残留。④待图像分析前,向细胞内添加1×荧光素工作液,然后进行图像分析(或者细胞放在37℃短时间孵育约5min后检测可增强信号)
2)活体成像:
a:工作液配置:①溶解1 g荧光素钾盐或钠盐于66.6 ml 无Ca2+和Mg2+的DPBS中,配置成15 mg/ml的溶液。②混匀,0.2μm滤膜过滤(可吹入惰性气体,如氮气,以防止氧化。)-80℃避光保存,一年内有效。
b:使用:①在冰上避光解冻(若是在冰上比较难解冻,可短暂温浴,并轻柔混匀)。
②按照动物体重150 mg/kg进行注射,(例如,20 g重的小鼠需要注射200μl )
③注射入体内10-20 min(待光信号达到zui强稳定平台期),再进行成像分析。
注:建议对每只动物模型都需要建立荧光素酶动力学曲线,从而确定zui高信号检测时间和信号平台期。
注射方法
1)腹腔注射:
将底物注射入腹腔中。推荐剂量为150 mg/Kg(例如,20 g重的小鼠需要注射200μl )。使用25 G的针头,1 ml注射器。
其方法如下示意图:
 

 
 
 
 
 
 
 
 
 
进针5 mm,斜向上30°角。
2)静脉注射:
小鼠的静脉注射通常是在小鼠的尾部或者眼眶静脉注射。静脉注射的推荐剂量同腹腔注射,150 mg/Kg。注射液体的zui大体积不可超过血容量的10%。一般对于20 g 小鼠其血容量为2 ml,故其zui大注射量应为200μl。使用1 ml注射器26 G针头,或者使用胰岛素注射器28 G针头,确保注射器中无气泡。注射前将动物置于加热灯下约5 min,或者将尾巴浸泡于温水中以扩张血管。操作时将小鼠固定于鼠筒或者烧杯中,乙醇消毒尾部,缓慢注射。

客户实例
说明: 图4
TIPE2抗炎因子在乳腺癌动物模型中的抗肿瘤治疗作用
选自文献:Zhang Z, Li L, Cao S, et al. Gene delivery of TIPE2 inhibits breast cancer development and metastasis via CD8 +, T and NK cell-mediated antitumor responses[J]. Molecular Immunology, 2017, 85:230.
FAQ
Q1: 荧光素的纯度对实验有成影响吗?
A有影响。99%以上的纯度较好。
Q2: 甲虫荧光素和萤火虫荧光素之间有区别吗?
A二者之间没有区别。
Q3: 如何溶解荧光素,其溶液稳定吗?
A荧光素钾盐在水中的溶解度为60 mg/ml,荧光素钠盐溶解度为100 mg/ml。荧光素游离酸是不溶于水的,但是在甲醇中的溶解度为10 mg/ml,在DMSO中溶解度为50 mg/ml。
荧光素钠盐和钾盐的水溶液短期内存放于-80℃,对实验效果没有明显影响。有实验证明,将荧光素溶解于脱氧中的水中会更稳定些。
对于一些较为敏感的试验,为了控制试验中的可变因素,较推荐新鲜配置的反应液 。例如,低浓度的荧光素酶或者并非zui适的反应条件是需要高质量的底物才能进行反应  。
Q4: 荧光素钠盐和荧光素钾盐有什么区别?
A目前的研究没有发现二者在使用效果上的区别,仅在物理特征上有些小的差别,如荧光素钠盐溶解度会高于荧光素钾盐。但是在体内实验研究中,有更多的研究者倾向于选择荧光素钾盐,据不完全统计,选用钾盐的使用人是钠盐使用人的3倍。
Q5: 荧光素钠盐,荧光素钾盐,和荧光素游离酸之间有什么区别?
A游离酸不溶于水,在甲醇中的溶解度为10 mg/ml,在DMSO中溶解度为50 mg/ml,同样可用 NaOH,KOH弱碱去调节溶液的PH值。荧光素的钠盐或者钾盐在使用过程中会更方便,尤其是在体内成像实验中,因其能够溶解在水中,反应毒性也会更小些。
Q6: 为什么溶解荧光素钠盐或者钾盐的时候需用不含Ca2+Mg2+离子的PBS,有无别的盐溶液可用来溶解荧光素?
APBS,或者其他的磷酸盐缓冲液,或DPBS,常用来进行生物学研究或者细胞相关研究。PBS/DPBS为等渗溶液,PH为7.2-7.6之间。DPBS和PBS之间无差别,只是通常情况下,DPBS是不含钙镁离子。钙镁离子可能会抑制某些蛋白酶的活性。此外Mg2+是催化荧光氧化的重要因素,Ca2+是和腔肠素氧化有关的离子。其他的盐溶液也可用来溶解荧光素,但要避免溶液中的阳离对实验造成影响。
Q7: 荧光素酶的发光特性?
A荧光素腹腔注射老鼠后约1 min后,能够表达荧光素酶的细胞开始发光,10 min后强度达到稳定的zui高点,在zui高点持续约20-30 min后开始衰减,约3 h后荧光素排除,发光全部消失,zui好的检测时间是在注射后15-35 min内。其动力学曲线如下图:

Q8: 怎么将荧光素注入小鼠体内,注射方法之间的区别是什么?
A荧光素可通过腹腔注射或尾部静脉注射注入小鼠体内。约1 min可扩散到小鼠全身。大部分情况下使用荧光素浓度为150 mg/kg。对于20 g的小鼠约使用3 mg的荧光素即可。对于腹腔注射来讲,扩散较慢,开始发光较慢,持续发光时间较长。对于荧光素的尾部静脉注射,扩散快,开始发光快,但发光持续时间较短。
Q9: 荧光素底物可以透过血脑屏障吗?
A荧光素底物约280道尔顿,荧光素的水溶性和脂溶性都非常好,很容易穿透细胞膜和血脑屏障。
Q10: 荧光素酶的表达稳定性如何?
A通过稳定筛选等过程,荧光素酶基因是能够插到细胞染色体内的。当细胞进行分裂、转移、分化时,荧光素酶也得到持续稳定的表达,荧光素酶的半衰期约为3 h,故只有活细胞才能持续表达荧光素酶。
产品信息

产品名称 产品编码 规格 价格(元)
D-Luciferin, Sodium Salt D 荧光素钠盐 40901ES01/02/03/08/10 0.1/0.5/1/5/10 g 1008/2556/3996/15876/31212
D-Luciferin, Potassium Salt D 荧光素钾盐 40902ES01/02/03/08 0.1/0.5/1/5 g 1000/2600/3996/14898
D-Luciferin Firefly, Free Acid D 萤火虫荧光素,游离酸 40903ES01/02/03 0.1/0.5/1 708/2556/3588
Coelenterazine Native 天然腔肠素 40904ES02/03/08 0.5/1/5 mg 589/1049/3899
Coelenterazine 400 a腔肠素 400a 40905ES02/03 0.5/1 mg 789/1499
Coelenterazine h 腔肠素h 40906ES02/03/08 0.5/1/5 mg 1329/2359/6759
Ready To Use Coelenterazine h 即用型腔肠素h 40907ES10 10 vials 6856
Coelenterazine f 腔肠素f 40908ES02/03 0.5/1 mg 1329/2359
Coelenterazine cp 腔肠素cp 40909ES72 250 μg 2359.00
Coelenterazine hcp 腔肠素hcp 40910ES72 250 μg 2359.00
Coelenterazine n 腔肠素n 40911ES72 250 μg 2359.00
Coelenterazine e 腔肠素e 40912ES02/03 0.5/1 mg 1329/2359
Coelenterazine 2-methyl 二甲基腔肠素 40913ES50 50 μg 929
Dual Luciferase Reporter Gene Assay Kit 双荧光素酶报告基因检测试剂盒 11402ES60/80 100/1000次 536/4236元
Luciferase Reporter Gene Assay Kit
萤火虫荧光素酶报告基因检测试剂盒
11401ES60/76/80 100/500/1000次 349/969/1748元

Amresco L-精氨酸盐酸盐-0877

Amresco L-精氨酸盐酸盐-0877

中文名:L-精氨酸盐酸盐

英文名:L-Arginine monohydrochloride

CasNo:1119-34-2

分子式:C6 H14 N4 O2 . H Cl
分子量:210.6700
中英文品名不符时,以英文品名为准

L-精氨酸盐酸盐英文名称:
L-Arginine HCL;L-Arginine hydrochloride;L-1-Amino-4-guanidovaleric acid hydrochloride;L-Guanidineaminovaleric acid hydrochloride
L-精氨酸盐酸盐 其他中文名称:
L-盐酸蛋白氨基酸;L-盐酸胍基戊氨酸;盐酸L-精氨酸;L-氢氯精氨酸
CAS号:1119-34-2
C6H14N4O2·HCl=210.66
含量:≥99.0%
比旋光度:+21.4 ~+23.6o
熔点:226~230°C
溶解试验:合格
含氯量:16.5~17.1%
硫酸根:≤ 0.03%
重金属:≤20ppm
砷:≤1.5ppm
干燥失重:≤0.20%
炽灼残渣:≤0.10%
性状:白色结晶性粉末,无气味,溶于水,微溶于热乙醇,不溶于乙醚。水溶液呈酸性。218℃时熔结,225℃时成固态。熔点235℃(分解)
用途:生化研究。一氧化氮合成酶底物,能转换为瓜氨酸和NO。靠一种依赖于NO的机制诱导胰岛素分泌
保存:RT,避光